[發(fā)明專利]青枯病菌培養(yǎng)基及青枯病菌電激感受態(tài)細(xì)胞的制備方法

無效

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• 申請日: 2012-12-25
• 公開（公告）號: CN103013883A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊穎倫;呂山花
• 申請（專利權(quán)）人: 聊城大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)病蟲害防治領(lǐng)域，具體是涉及一種青枯病菌培養(yǎng)基及青枯病菌電激感受態(tài)細(xì)胞的制備方法。

背景技術(shù)

青枯病是茄科植物上由茄科雷爾氏菌（Ralstonia?solanacearum）引起的一種世界范圍的細(xì)菌性土傳病害，廣泛分布于熱帶、亞熱帶及溫帶地區(qū)。青枯病菌具有廣泛的寄主，可侵染50多個科的200余種植物，植物一旦感染這種病原菌后，會造成作物的大量減產(chǎn)。由于“溫室效應(yīng)”所引起的全球氣候變暖，該病原菌呈現(xiàn)出向高緯度地區(qū)蔓延的趨勢，給作物生產(chǎn)帶來極大的危害。青枯病是一種維管束病害，在作物的整個生長期都可發(fā)生，現(xiàn)蕾開花期癥狀最明顯，特別是溫暖潮濕、雨水充沛的環(huán)境發(fā)病尤為嚴(yán)重。病原菌侵害植株的維管束，使莖基部和根維管束變褐色，尤其是導(dǎo)管部分變褐甚至腐爛。感病的塊莖切開后，可見維管束呈褐色，切面不需擠壓即可溢出白色菌膿，這也是判斷得此病的標(biāo)準(zhǔn)。

在生產(chǎn)上對于青枯病目前還沒有很好的防治措施。化學(xué)藥劑及農(nóng)業(yè)綜合防治效果都不明顯，化學(xué)藥劑防治一方面提高了生產(chǎn)成本，另一方面也對環(huán)境造成污染；農(nóng)業(yè)綜合防治費(fèi)時費(fèi)力，難以推廣。因此，深入了解青枯病菌的致病機(jī)理，對有效防止和控制青枯病的發(fā)生有很大的幫助。研究青枯病菌的致病機(jī)理的關(guān)鍵是獲得無致病能力的突變菌株，目前最佳的方法是通過轉(zhuǎn)座子進(jìn)行青枯病菌致病菌株基因組的突變，進(jìn)行轉(zhuǎn)座子突變的前提條件是獲得具有較高轉(zhuǎn)化效率的青枯病菌株的感受態(tài)細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種青枯病菌培養(yǎng)基及青枯病菌電激感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，以便獲得具備較高電激轉(zhuǎn)化效率的青枯病菌感受態(tài)細(xì)胞。

本發(fā)明的技術(shù)方案是，一種青枯病菌培養(yǎng)基，固體，每1升培養(yǎng)基中，各組分及含量為：500克新鮮馬鈴薯浸出液；Ca(NO₃)₂.4H₂O?1.0克；Na₂HPO₄.12H₂O?2.0克；蛋白胨5.0克；酵母浸出物1克；蔗糖15克；瓊脂15克。

前面所述的青枯病菌培養(yǎng)基，優(yōu)選的方案是，pH值6.8。

前面所述青枯病菌培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下：

（1）取新鮮馬鈴薯（優(yōu)選的，所用新鮮馬鈴薯為500克）切丁（優(yōu)選1厘米見方的丁），放到盛有蒸餾水的燒杯（優(yōu)選盛有800毫升蒸餾水的1升燒杯）中加熱至沸騰后，自然冷卻至室溫，用尼龍網(wǎng)（優(yōu)選200目的尼龍網(wǎng)）過濾得馬鈴薯浸出液，棄掉馬鈴薯塊；

（2）將Ca(NO₃)₂.4H₂O、Na₂HPO₄.12H₂O、蛋白胨、酵母浸出物、蔗糖依次加入到馬鈴薯浸出液中，用蒸餾水定容到1升，調(diào)節(jié)pH值至6.8（優(yōu)選的，用鹽酸或氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值）；

（3）用三角瓶（優(yōu)選500毫升的三角瓶）進(jìn)行分裝（優(yōu)選的，各取200毫升培養(yǎng)基進(jìn)行分裝）為5瓶，每瓶加入瓊脂3克，制作成固體培養(yǎng)基。

一種青枯病菌培養(yǎng)基，液體，每1升培養(yǎng)基中，各組分及含量為：500克新鮮馬鈴薯浸出液；Ca(NO₃)₂.4H₂O?1.0克；Na₂HPO₄.12H₂O??2.0克；蛋白胨5.0克；酵母浸出物1克；蔗糖15克。

所述的青枯病菌培養(yǎng)基，pH值6.8。

前面所述青枯病菌培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下：

（1）取新鮮馬鈴薯（優(yōu)選的，所用新鮮馬鈴薯為500克）切丁（優(yōu)選1厘米見方的丁），放到盛有蒸餾水的燒杯（優(yōu)選盛有800毫升蒸餾水的1升燒杯）中加熱至沸騰后，自然冷卻至室溫，用尼龍網(wǎng)（優(yōu)選200目的尼龍網(wǎng)）過濾得馬鈴薯浸出液，棄掉馬鈴薯塊；

（2）將Ca(NO₃)₂.4H₂O、Na₂HPO₄.12H₂O、蛋白胨、酵母浸出物、蔗糖依次加入到馬鈴薯浸出液中，用蒸餾水定容到1升，調(diào)節(jié)pH值至6.8（優(yōu)選的，用鹽酸或氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值）；

（3）用三角瓶（優(yōu)選500毫升的三角瓶）進(jìn)行分裝（優(yōu)選的，各取200毫升培養(yǎng)基進(jìn)行分裝）為5瓶。

本發(fā)明還提供了一種青枯病菌電激感受態(tài)細(xì)胞的制備方法，步驟如下：