[發明專利]一種LKB1蛋白檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201210562574.9
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN103884694A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 萬曉春;王偉;粟武
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市科進知識產權代理事務所(普通合伙) 44316
• 代理人: 宋鷹武

1.一種LKB1蛋白檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

用量子點標記LKB1單克隆抗體，得到量子點LKB1單克隆抗體；

用量子點LKB1單克隆抗體與標本反應；

將反應后的標本置于顯微鏡下觀察，

其中，所述的標本為細胞標本或組織標本，所述的細胞標本為組織印片、細胞爬片或細胞涂片，所述的組織標本為石蠟切片或冰凍切片。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的用量子點標記LKB1單克隆抗體包括以下步驟：

將量子點表面用GHS進行修飾，得到GSH-量子點；

在GSH-量子點中加入SMCC，形成SMCC-GHS-量子點；

將SMCC-GHS-量子點與LKB1單克隆抗體反應，得到量子點LKB1單克隆抗體。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的將量子點表面用GHS進行修飾為：

將量子點加入到GHS中進行反應，得到第一反應液；

將第一反應液離心，收集沉淀；

將所得沉淀用potassium?t-butoxide溶液溶解，得到第二液體；

將第二液體透析，去除第二液體中的GSH與potassium?t-butoxide，得到GSH-量子點。

4.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的SMCC-GHS-量子點的制備方法為：

將GSH-量子點與sulfo-SMCC水溶液混合反應，得到第三反應液；

在第三反應液中加入巰基乙醇，得到第四反應液；

將第四反應液進行層析，得到第五反應液，再將層析后得到的第五反應液離心，離心所得沉淀重新溶解，得到SMCC-GHS-量子點。

5.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述的SMCC-GHS-量子點與LKB1單克隆抗體反應為：

LKB1單克隆抗體中加入DTT溶液進行還原，得到還原的LKB1單克隆抗體；

將SMCC-GHS-量子點與還原的LKB1單克隆抗體混合反應，得到量子點LKB1單克隆抗體。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的用量子點LKB1單克隆抗體與標本反應包括以下步驟：

將標本用固定液進行固定；

用洗滌液沖洗固定后的標本；

過氧化氫處理標本；

封閉液處理標本；

將量子點LKB1單克隆抗體與標本進行反應。

7.一種LKB1蛋白檢測試劑盒，其特征在于，包括量子點LKB1單克隆抗體。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，還包括固定液、洗滌液、封閉液和過氧化氫。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，還包括陽性對照品和陰性對照品，所述的陽性對照品為過表達LKB1蛋白的細胞，所述的陰性對照品為LKB1表達沉默的細胞。

10.根據權利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于，所述的固定液選自戊二醛、多聚甲醛、乙醇、甲醇或丙酮。

11.根據權利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于，所述的洗滌液為PBS溶液。

12.根據權利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于，所述的封閉液為正常山羊血清。