[發明專利]凹凸棒土負載殼聚糖包被橙色粘球菌的固定化方法

無效

• 申請號: 201210561348.9
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN103045581A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 賈建波
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 淮安市科翔專利商標事務所 32110
• 代理人: 韓曉斌

1.凹凸棒土負載海藻酸鈉固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征是：它是以凹凸棒土為原料，對凹凸棒土進行改性處理后負載海藻酸鈉制備微球，然后微球采用吸附法對β-葡萄糖苷酶進行固定化。

2.根據權利要求1所述的凹凸棒土負載海藻酸鈉固定β-葡萄糖苷酶的制備方法，其特征是：該制備方法包括以下步驟：

1)凹土純化：凹凸棒土與去離子水混合，凹凸棒土與去離子水的比例為1:5（w/v），常溫下100r/min攪拌24h，靜置沉降24h后，倒掉最下層雜質和上清液，再加入與上清液等量的去離子水，常溫100r/min攪拌24h，靜置24h，倒掉上清液和下層雜質，抽濾，105℃烘干，得純化凹土；

2)酸改性凹土：取純化凹土，加入質量濃度為60%的硫酸溶液，純化凹土與硫酸溶液的比例為1:5（w/v），在常溫下，以100r/min的轉速攪拌24h，抽濾，水洗濾餅至水為中性，濾餅在105℃烘干；

3）改性凹凸棒土負載海藻酸鈉的微球：于40℃水浴，配制2%(w/v)海藻酸鈉水溶液，攪拌使之呈均勻體系；稱取酸改性凹土按1:10(w/v)加入去離子水，置于回旋式振蕩器上以100r/min轉速震蕩，分散24h，將分散的酸改性凹土加入2%(w/v)海藻酸鈉水溶液中置于攪拌器內攪拌，酸改性凹土與2%(w/v)海藻酸鈉水溶液比例為1:10(w/v)，在40-60℃下復合2h；將復合液體通過內徑為0.8mm的硅膠管由恒流泵以10?ml/min的速度滴到2%?(w/v)CaCl₂溶液中，復合液體與2%(w/v)?CaCl₂溶液的體積比為1:1，持續攪拌交聯固化12h，抽濾，并用去離子水沖洗，85℃干燥，冷卻，研細過100目篩，得凹凸棒土負載海藻酸鈉微球；

4)β-葡萄糖苷酶的固定：將凹凸棒土負載海藻酸鈉微球加入到裝有濃度為10mg/ml?的β-葡萄糖苷酶pH6.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液的容器中，凹凸棒土負載海藻酸鈉微球與β-葡萄糖苷酶的質量比例為30:1~40:1，溫度40℃，150?r/min振蕩60min，抽濾，濾餅-40℃預凍3h，再迅速移入冷凍干燥機冷凍干燥?18-20h，凍干后水分控制在4-5%，真空包裝，得凹凸棒土負載海藻酸鈉固定化β-葡萄糖苷酶。