[發明專利]與黃瓜苦味性狀相關的SNP標記及其應用

有效

• 申請號: 201210559855.9
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103013966A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 黃三文;尚軼;張忠華;李穎;馬永碩;齊建建;王深浩;王曄
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12N15/61;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;C12P33/00;C12N15/11;C12Q1/68;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.黃瓜Csa6G088690蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.編碼權利要求1所述蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

3.含有權利要求2所述基因的載體。

4.含有權利要求2所述基因的轉基因細胞系。

5.權利要求2所述的基因在葫蘆素合成中的應用。

6.一種與黃瓜苦味性狀相關的SNP標記，其特征在于，其位于編碼黃瓜Csa6G088690蛋白的基因序列第1178bp處，此處堿基為G的黃瓜苦味，此處堿基為A的黃瓜不苦；所述編碼黃瓜Csa6G088690蛋白的基因序列如SEQ?ID?No.2所示。

7.用于檢測權利要求6所述與黃瓜苦味性狀相關的SNP標記的引物對，其特征在于，包括正向引物F5’-GAAGATGAAAATAGTCGATATAGAT-3’和反向引物R5’-ATGATATGAATTGCTAGCTAGTTCT-3’。

8.權利要求6所述與黃瓜苦味性狀相關的SNP標記在鑒定苦味黃瓜品種中的應用，其包括步驟：

1）提取待測黃瓜的基因組DNA；

2）以待測黃瓜的基因組DNA為模板，利用權利要求7所述引物對F和R，進行PCR擴增反應；

3）檢測PCR擴增產物；

其中，步驟2）中PCR反應使用的擴增體系以20μl計為：10-20ng/μl模板DNA1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L?dNTP?mix?0.4μl，0.5U/μL?Taq?DNA聚合酶10×PCR反應緩沖液2μl，余量為水；

PCR反應條件為：94℃5分鐘；94℃20秒，55℃20秒，72℃30秒，35個循環；72℃10分鐘；

步驟3）中檢測PCR擴增產物采用dCAPS法，具體為：用內切酶EcoR?V對PCR擴增產物進行酶切，并對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，如果檢測結果僅為一條208bp大小的條帶，則待測黃瓜屬于苦味黃瓜品種，檢測結果為一條182bp大小的條帶，則待測黃瓜屬于普通品種。

9.含有權利要求7所述引物對的用于檢測黃瓜苦味性狀的試劑盒，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液、標準陽性模板中的一種或多種。

10.權利要求6所述與黃瓜苦味性狀相關的SNP標記在黃瓜分子標記輔助育種中的應用。