[發明專利]一種Lactobacillus casei Zhang（CGMCC 1697）的檢測方法

有效

• 申請號: 201210559154.5
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN102978290A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 張和平;張家超;陳永福
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/245
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 向華

技術領域

本發明涉及一種用于檢測Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）的檢測方法的設計，應用該方法可以對腸道中的Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）進行檢測，可準確，快速的完成發酵乳制品，發酵食品以及人體腸道中益生菌Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）定性和定量測定。?

技術背景

Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）是從內蒙古農業大學乳酸菌菌種資源庫保藏的243株分離自自然發酵酸馬奶中的乳桿菌中優選的1株具有優良益生特性的乳桿菌。該菌株在消化系統中具有優異的耐受胃酸、膽鹽和牛磺膽酸鈉水解能力。其具有乳桿菌共同的特性，即為革蘭氏陽性、過氧化氫酶試驗陰性、硝酸鹽還原試驗陰性、不液化明膠、無運動性、能在pH4.5的BLB液體培養基中生長發育。L.casei?Zhang（CGMCC?1697）屬同型乳酸發酵乳桿菌，葡萄糖發酵不產氣，經EMP途徑只產生乳酸，且產生L-乳酸。能夠利用核糖、葡萄糖、甘露糖、甘露醇、果糖、半乳糖、蔗糖、麥芽糖、蕈糖、山梨醇以及七葉苷、水楊苷和甘露醇產酸，而不從阿拉伯糖、木糖、蜜二糖、棉子糖產酸，不代謝乳糖或弱發酵乳糖，不發酵鼠李糖。Lactobacillus?casei?Zhang（CGMCC?1697）菌株已經在申請號為200610127362.2、200710129939.8的中國專利申請中公開，在此將上述專利文獻公開的全部內容引入作為參考。?

進一步經16S?rDNA序列分析，表明L.casei?Zhang（CGMCC?1697）與L.casei標準菌株ATCC?334的同源性為100%。?

L.casei?Zhang（CGMCC?1697）具有較強的抗人工胃液消化能力，在pH值為3.0和pH值為4.0的人工胃液中持續消化3h后其活菌數量不受影響，人工胃液消化后進入人工腸液消化24h后，仍保持較高數量的活菌。L.casei?Zhang（CGMCC?1697）對膽鹽具有極強的耐受性，能夠耐受介質中膽鹽的最大濃度為1.6g/100mL。L.casei?Zhang（CGMCC?1697）在生長過程中可以分解培養介質中的牛磺膽酸鈉釋放出游離膽酸，對介質中膽固醇的脫除量為74.41mg/L，膽固醇降低率為49.61%。用L.casei?Zhang（CGMCC?1697）飼喂高脂血癥模型大鼠，可顯著降低血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和LDL-C濃度，HDL-C濃度顯著升高。研究表明L.casei?Zhang（CGMCC?1697）通過菌體對膽固醇的吸收吸附及減少肝腸循環中的膽酸來達到降血脂的功效。?

給小鼠灌服L.casei?Zhang（CGMCC?1697），L.casei?Zhang（CGMCC?1697）菌株能夠在小鼠腸道內定殖，并對病原菌具有拮抗作用。小鼠灌服L.casei?Zhang（CGMCC?1697）可以顯著增加小鼠血清中IgG含量和腸粘膜SIgA含量，可以顯著提高小鼠外周血中CD3+、CD4+、CD8+的比例，優化了CD4+/CD8+比值,顯著上調血清中IFN-γ和IL-12含量，下調IL-1α和TNF-α水平。這些結果說明了L.casei?Zhang（CGMCC?1697）對小鼠的細胞免疫、體液免疫及腸黏膜局部免疫具有調節功能。動物實驗表明L.casei?Zhang（CGMCC?1697）具有顯著抑制肝癌細胞H22細胞株具有顯著的抑制作用。?

2007年，通過代謝調控的手段，完成了益生乳酸菌L.casei?Zhang（CGMCC?1697）高密度發酵的小試和中試。200L發酵罐9次發酵發酵液中菌體密度平均可達2.9×10¹⁰cfu/ml，發酵液經離心收集菌體后冷凍干燥可得到平均活菌數2.65×10¹¹cfu/g的菌粉，能夠滿足益生菌制劑和發酵劑對高活菌數的要求，已達到國際水平。?