[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)中性蛋白酶的米曲霉菌株及其液體發(fā)酵方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210559100.9
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103013844A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉順啟;王興吉;李方方;劉文龍
• 申請（專利權(quán)）人: 山東隆科特酶制劑有限公司
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N9/62;C12R1/69
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一株高產(chǎn)中性蛋白酶的米曲霉菌株(Aspergillus?oryzae)，菌株保藏號為CGMCC6848。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)中性蛋白酶的米曲霉菌株，所述米曲霉菌株具有低產(chǎn)孢子、高產(chǎn)中性蛋白酶的特性，發(fā)酵活力在2.5萬u/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)中性蛋白酶的米曲霉菌株，所述米曲霉菌株所產(chǎn)中性蛋白酶酶活力在20821u/mL以上。

4.一種利用米曲霉菌株CGMCC6848生產(chǎn)中性蛋白酶的方法，包括如下步驟。

種子培養(yǎng)：菌株進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，搖瓶培養(yǎng)基配方為淀粉3-10%，大豆蛋白2-5%，麩皮0.2-0.5%，硝酸鈉0.2-0.5%，磷酸二氫鉀0.2-0.5%，玉米漿0.5-2%。培養(yǎng)溫度31-33℃，培養(yǎng)時間50-70小時；

液體發(fā)酵：在50L發(fā)酵罐進(jìn)行液體發(fā)酵實驗，接種量10-15%，發(fā)酵過程補(bǔ)料控制pH在6.0-6.5，培養(yǎng)溫度30-32℃，罐壓0.07MPa,風(fēng)量0.2-1.5vvm,培養(yǎng)周期100-120小時；發(fā)酵后進(jìn)行中性蛋白酶的提取與精制。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種利用米曲霉菌株CGMCC6848生產(chǎn)中性蛋白酶的方法，其特征在于所述中性蛋白酶的提取與精制方法如下：發(fā)酵結(jié)束后，按發(fā)酵液體積加入40%的水和0.3%氯化鈣，加入3%珍珠巖助濾劑，進(jìn)行壓濾，濾液經(jīng)超濾濃縮后可進(jìn)行酒精溶析得到固體酶制劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種利用米曲霉菌株CGMCC6848生產(chǎn)中性蛋白酶的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：淀粉5-10%，大豆蛋白3-6%，麩皮1-3%，硝酸鈉0.3-1%，磷酸二氫鉀0.2-0.8%,玉米漿1-2%，補(bǔ)料配方為：淀粉10-20%,豆餅粉4-8%，硫酸銨0.2-0.5%，玉米漿0.8-1.5%。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)中性蛋白酶的米曲霉菌株在生產(chǎn)中性蛋白酶中的應(yīng)用。