[發(fā)明專利]一種二甲四氯除草劑降解菌SE08及其篩選方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210558681.4
• 申請(qǐng)日: 2012-12-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103173377A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚琳;曾維愛(ài);鄭雄志;周志成;李宏光;胡秋龍;譚濟(jì)才;江紫薇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);湖南省煙草公司郴州市公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02;B09C1/10;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/36
• 代理公司: 杭州華知專利事務(wù)所 33235
• 代理人: 寧岡

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于環(huán)境污染生物修復(fù)領(lǐng)域，具體是一種二甲四氯除草劑降解菌SE08及其篩選方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

中國(guó)從1956年開(kāi)始在稻田和煙田大規(guī)模使用苯氧羧酸類除草劑，其中二甲四氯除草劑因除草效果顯著、價(jià)格低廉而被廣泛應(yīng)用。二甲四氯除草劑是激素型內(nèi)吸傳導(dǎo)選擇性苯氧羧酸類除草劑，易被植物的根和葉部吸收，對(duì)植物有強(qiáng)烈的生理活性，低濃度時(shí)促進(jìn)生長(zhǎng)，高濃度時(shí)抑制生長(zhǎng)。但是二甲四氯容易進(jìn)入水生系統(tǒng)，對(duì)水生生物的毒性不容忽視。二甲四氯在土壤表面容易轉(zhuǎn)移且存在污染地下水的可能性；另一方面，自20世紀(jì)70年代初以來(lái)，隨著除草劑的廣泛使用，雜草對(duì)除草劑產(chǎn)生的耐藥性、抗藥性問(wèn)題凸顯，自然界中也已產(chǎn)生越來(lái)越多不同類型的抗除草劑的物種，因此，消除環(huán)境中除草劑的殘留危害具有重要意義。近年來(lái)，隨著人們對(duì)生物修復(fù)技術(shù)研究的深入，利用微生物來(lái)降解環(huán)境中殘留的除草劑已成為當(dāng)今的熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外學(xué)者在除草劑的微生物降解方面做了大量研究，但有關(guān)二甲四氯微生物降解的報(bào)道甚少。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種二甲四氯除草劑降解菌SE08，利用了該菌株降解環(huán)境中殘留的除草劑，適用于降解土壤或水中的二甲四氯殘留，本發(fā)明要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供上述二甲四氯除草劑降解菌SE08的篩選方法。本發(fā)明要解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供上述二甲四氯除草劑降解菌SE08的應(yīng)用。?

本發(fā)明的一個(gè)技術(shù)方案是：一種二甲四氯除草劑降解菌SE08，該降解菌為腸桿菌(Enterobacter?sp.)，保藏編號(hào)為CGMCC?No.7016，保藏日期：2012.12.18，?保藏在中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心。?

進(jìn)一步地，上述二甲四氯除草劑降解菌SE08菌株的形態(tài)鑒定：該菌株為革蘭氏陰性好氧菌，無(wú)芽孢無(wú)莢膜；在NA固體培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，菌落的形狀為橢圓，邊緣整齊，表面光滑凸起，菌落為奶白色，不透明，體細(xì)胞呈短桿狀，長(zhǎng)2.0~2.5μm，寬0.6~0.8μm；該菌株16S?rRNA序列全長(zhǎng)1076bp，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1。?

進(jìn)一步地，NA固體培養(yǎng)基配方如下：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1L，瓊脂20.0g，調(diào)節(jié)pH7.0-7.4，121℃滅菌30min。?

本發(fā)明的第二個(gè)技術(shù)方案是提供上述二甲四氯除草劑降解菌SE08的篩選方法，具體包括以下步驟：?

（1）取污染土樣10.0g于三角瓶中，加入100mL含50mg/L二甲四氯的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液，25~37℃下，150~220rpm振蕩培養(yǎng)5天；?

（2）取出10mL振蕩液加入到90mL含125mg/L二甲四氯的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液，在25~37℃，150~220rpm繼續(xù)振蕩培養(yǎng)5天，依次類推，提高二甲四氯濃度分別為250、500、750、1000mg/L，每隔5天，取出10mL培養(yǎng)液加入到90mL含梯度升高濃度的二甲四氯無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中，25~37℃下，150~220rpm繼續(xù)振蕩培養(yǎng)5天；?

（3）取1000mg/L二甲四氯無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液中的培養(yǎng)物，加入到含有濃度為20g/L瓊脂的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中進(jìn)行稀釋涂布，30℃下培養(yǎng)5天；?

（4）挑取單菌落，然后在含250mg/L二甲四氯和20g/L瓊脂的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基上采用平板劃線法進(jìn)行分離純化，獲得純化的以二甲四氯為唯一碳源和能量生長(zhǎng)的菌株。?

作為優(yōu)選，所述無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)液的配方如下：KH₂PO₄0.5g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.2g，CaC1₂0.1g，NaC10.2g和1.0mL微量元素溶液，蒸餾水1000mL，調(diào)節(jié)pH為7.0，121℃滅菌30min。?