[發(fā)明專利]一種傷科接骨外用制劑的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210555854.7
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN102998412A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張成海;周文波;李冬梅;陳菲
• 申請（專利權(quán)）人: 大連美羅中藥廠有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N27/62;G01N30/02;G01N31/16;A61K36/56;A61P29/00
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 牛利民;武晶晶

1.一種傷科接骨的外用制劑的檢測方法，所述外用制劑是由下述重量配比的藥材制備的：

其中，以上十二味藥材，除冰片、馬錢子粉外，朱砂水飛成極細(xì)粉，其余藥材粉碎成粗粉，與馬錢子粉混合，用乙醇提取并濃縮成清膏，然后，將該清膏、冰片、朱砂與藥學(xué)上可接受的輔料制備成外用制劑；

所述的檢測方法包括如下項目：性狀、鑒別和含量測定。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中，所述外用制劑是由下述重量配比的藥材制備的：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中，所述外用制劑是由下述重量配比的藥材制備的：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中，所述外用制劑是由下述重量配比的藥材制備的：

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其中，所述外用制劑是由下述重量配比的藥材制備的：

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的檢測方法，其中，所述的鑒別為：

（1）取所述外用制劑，置顯微鏡下觀察；不規(guī)則顆粒細(xì)小，暗棕紅色，有光澤，邊緣暗黑色；

（2）取所述外用制劑約10g，加95%乙醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，溶液蒸干，殘渣加水10ml微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次5ml，水液棄去；取正丁醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材0.5g，按供試品溶液制備方法制備，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI?B）試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸無水乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視;供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點;

（3）取所述外用制劑約10g，加乙醚50ml，密塞，超聲處理15min，濾過，乙醚液50℃水浴揮散至近干，殘渣加醋酸乙酯1ml溶解，作為供試品溶液;另取冰片對照藥材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI?B）試驗，吸取供試品溶液10μl與對照品溶液5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛濃硫酸溶液；在105℃加熱至斑點顯色清晰；置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點;

（4）取所述外用制劑約10g，加乙醇50ml，密塞，超聲處理20分鐘，放冷，濾過，溶液蒸干；殘渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，以濃氨試液調(diào)pH?9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml；合并三氯甲烷液，水浴揮去三氯甲烷，殘渣加三氯甲烷1ml溶解，作為供試品溶液；另取士的寧對照品、馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI?B）試驗，吸取供試品溶液10μl與對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（3：6：0.6：0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的檢測方法，其中，所述的檢查為重金屬及有害元素的檢查，照中國藥典附錄IX?B電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定鉛、鎘、砷、汞、銅測定法。

8.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的檢測方法，其中，所述含量測定為應(yīng)用中國藥典2010年版一部附錄VI?D高效液相色譜法進(jìn)行測定。

9.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的檢測方法，其中，所述外用制劑為凝膠劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，包括：

【性狀】內(nèi)容物為紅色膠狀半固體，氣微腥；

【鑒別】

（1）取所述凝膠劑，置顯微鏡下觀察：不規(guī)則顆粒細(xì)小，暗棕紅色，有光澤，邊緣暗黑色；

（2）取所述凝膠劑約10g，加95%乙醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，溶液蒸干，殘渣加水10ml微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取3次，每次10ml，合并正丁醇提取液，再用正丁醇飽和的水洗滌3次，每次5ml，水液棄去；取正丁醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材0.5g，按供試品溶液制備方法制備，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI?B）試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（13：7：2）10℃以下放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸無水乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；

（3）取所述凝膠劑約10g，加乙醚50ml，密塞，超聲處理15min，濾過，乙醚液50℃水浴揮散至近干，殘渣加醋酸乙酯1ml溶解，作為供試品溶液；另取冰片對照藥材，加醋酸乙酯制成每1ml含10mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI?B）試驗，吸取供試品溶液10μl與對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛濃硫酸溶液；在105℃加熱至斑點顯色清晰；置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；

（4）取所述凝膠劑約10g，加乙醇50ml，密塞，超聲處理20分鐘，放冷，濾過，溶液蒸干；殘渣加3%（ml/ml）硫酸溶液10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，以濃氨試液調(diào)pH?9-10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml；合并三氯甲烷液，水浴揮去三氯甲烷，殘渣加三氯甲烷1ml溶解，作為供試品溶液；另取士的寧對照品、馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI?B）試驗，吸取供試品溶液10μl與對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（3：6：0.6：0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；

【檢查】

重金屬及有害元素照鉛、鎘、砷、汞、銅測定法（附錄IX?B電感耦合等離子體質(zhì)譜法）測定，汞不得過百分之一點五，鉛不得過百萬分之十；鎘不得過百萬分之五；砷不得過百萬分之五；銅不得過百萬分之二十；

pH值取所述凝膠劑10g，加10倍水溶解，照pH值測定法(中國藥典2010年版一部附錄VII?G)操作，所述凝膠劑pH應(yīng)在6.5-7.5之間；

粒度取所述凝膠劑適量，置于載玻片上，涂成薄層，覆以蓋玻片，共涂3片，照粒度測定法(中國藥典2010年版一部附錄XI?B第一法)測定，均不得檢出大于180μm的粒子；

其他所述凝膠劑應(yīng)符合凝膠劑項下有關(guān)的各項規(guī)定（中國藥典2010年版一部附錄IQ）；

【含量測定】

1.馬錢子粉照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI?D)測定；

色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，柱溫室溫，以乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L的磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)pH值2.8）（21：79）為流動相，檢測波長為254nm，理論塔板數(shù)按士的寧色譜峰計算，不得低于5000；

對照品溶液制備取士的寧對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.004mg的溶液；

供試品溶液制備取所述凝膠劑約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250w，頻率40KHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，取續(xù)濾液5ml，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過，濾液作為供試品溶液；

測定法分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀中，測定，即得；

2.三七照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI?D)測定；

色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，柱溫室溫，以乙腈-水（21：79）為流動相，檢測波長為203nm，理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1色譜峰計算，不得低于10000；

對照品溶液制備取人參皂苷Rg1對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每1ml含0.1mg的溶液；

供試品溶液制備取所述凝膠劑約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250w，頻率40KHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，充分振搖，濾過，取濾液5ml，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過，濾液作為供試品溶液；

測定法分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀中，測定，即得；

3.朱砂

取所述凝膠劑約5g，精密稱定，置250ml錐形瓶中，加硫酸40ml，硝酸鉀6g，加熱微沸30分鐘，使成無色透明溶液，放冷，加水50ml，滴加1％高錳酸鉀溶液至顯粉紅色以2min內(nèi)不消失為度，再滴2％硫酸亞鐵溶液至紅色消失，用硫氰酸銨滴定液(0.05mol／L)滴定；每1mL硫氰酸銨滴定液(0.05mol／L)相當(dāng)于5.815mg硫化汞。