[發(fā)明專利]一種銀杏內酯有效部位檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210555240.9
• 申請日: 2012-04-23
• 公開（公告）號: CN103091412A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設計）人: 孫毅;朱永紅;童正兵;王婕
• 申請（專利權）人: 成都百裕科技制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.銀杏內酯有效部位的檢測方法，其包括以下分項檢測：?

a)性狀：類白色或微黃色結晶性粉末；?

b)水分：60℃減壓干燥減失重量小于5.0％；?

c)蛋白質：在595nm波長處吸光度小于0.05；?

d)鞣質、樹脂、草酸鹽、鉀離子的檢測：?

鞣質：取蛋白質檢查項供試品溶液1ml，加入稀醋酸1滴，再加明膠氯化鈉試液5滴，搖勻，放置10分鐘，未出現(xiàn)渾濁或沉淀；?

樹脂：取蛋白質檢查項供試品溶液5ml，加鹽酸1滴，放置30分鐘，無樹脂狀物質析出；?

草酸鹽：取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，用稀鹽酸調節(jié)pH值至1～2，濾過，濾液用氨水調節(jié)pH值為5～6，加3％氯化鈣溶液3滴，放置10分鐘，未出現(xiàn)渾濁或沉淀；?

鉀離子：取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，置10ml納氏比色管中，加堿性甲醛溶液0.6ml、3％EDTA溶液2滴、3％四苯硼鈉溶液0.5ml，加水稀釋至10ml，另取標準氯化鉀溶液0.8ml，同法試驗，供試品溶液的濁度不高于對照溶液；?

e)殘留溶劑?

(1)乙醇、乙酸乙酯和正己烷：含乙醇和乙酸乙酯均小于0.5％，正己烷小于0.029％；?

(2)樹脂殘留量：含己內酰胺小于0.0015％；?

f)總銀杏酸：含總銀杏酸小于5ppm；?

g)大分子和聚合物：凝膠色譜法測定無殘留大分子和聚合物，LC-MS法測定，結果無分子量大于1000的大分子和聚合物，?

h)重金屬：小于10ppm；?

i)砷鹽：小于2ppm；?

j)異常毒性：制成每1ml中含0.2mg的溶液，符合靜脈注射法給藥；?

k)指紋圖譜：HPLC法測定，記錄60分鐘的色譜圖，按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)，四個共有峰相似度大于0.95；?

1)含量：HPLC法測定，按干燥品計算，含白果內酯(C₁₅H₁₈O₈)應為25.0％～50.0％、銀杏內酯A(C₂₀H₂₄O₉)應為20.0％～45.0％、銀杏內酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)應為10.0％～30.0％、銀杏內酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)應為5.0％～15.0％，且白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C總量大于95％；?

m)熱原檢查：體溫升高低于0.6℃。?

2.根據(jù)權利要求1的銀杏內酯有效部位的檢測方法，其中a)、c)項檢測如下?

a)性狀：類白色或微黃色結晶性粉末；?

在乙酸乙酯中易溶，在甲醇、乙醇中溶解，在水中幾乎不溶；?

c)蛋白質：在595nm波長處吸光度小于0.05；?

取銀杏內酯約24mg，加乙醇2ml溶解后，加水稀釋至50ml，作為供試品溶液，照考馬斯亮藍法測定，以相應的試劑為空白，在595nm波長處吸光度小于0.05。?

3.根據(jù)權利要求2的銀杏內酯有效部位的檢測方法，其中分項k)指紋圖譜和1)含量測定采用的檢測方法相同，條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-水(25∶10∶65)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度：105℃；載氣流速：3.00L/min；柱溫：40℃；理論板數(shù)按白果內酯峰計算應不低于2500，白果內酯峰與銀杏內酯C峰的分離度應大于1.5。?

4.根據(jù)權利要求3的銀杏內酯有效部位的檢測方法，其中分項g)大分子和聚合物的測定方法如下：?

(1)凝膠色譜法色譜柱：Phenomenex?BioSep-SEC-S2000，300×7.8mm，5um，流動相：內含0.02％的疊氮化鈉0.71％硫酸鈉溶液，柱溫：35℃，檢測器溫度：35℃，流速：0.5ml/min。結果：無殘留大分子和聚合物。?

(2)HPLC-MS聯(lián)用法流動相：90∶10甲醇-水、色譜柱：Agilent?RX-C₁₈(2.1×50mm)柱溫：25℃，流速：0.3ml/min。?