[發明專利]唐氏綜合征21號染色體相關miRNA、基因、篩選方法和應用

無效

• 申請號: 201210555209.5
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103045596A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 徐勇;李武縣;戴勇
• 申請（專利權）人: 徐勇
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

技術領域

本發明涉及基因工程領域，尤其涉及一種與唐氏綜合征21號染色體相關的miRNA、基因、篩選方法和應用。

背景技術

唐氏綜合征(Down?syndrome，簡稱DS)又叫21三體（Trisomy?21，Ts21）綜合征，因多出一條或部分21號染色體而導致的一種出生缺陷型疾病。約每700例嬰兒中就有1例。患者表現為先天性智力低下、精神遲鈍、體格發育不全和先天性心臟缺陷等80多種臨床癥狀。生物學研究已發現21號染色體上含有500多個基因，包括5個miRNA（microRNA，微小RNA）基因：miR-99a、let-7c、miR-125b-2、miR-155和miR-802。miRNA是一類長度為19~25個核苷酸的內生性單鏈非編碼調節RNA。miRNA可與靶基因mRNA的3’端特異性結合，使其降解或轉錄抑制，在細胞的增值、分化、凋亡、胚胎的發育和組織的分化等生物學過程中具有非常重要的作用。研究表明21號染色體上5個miRNA的過表達均與DS患者各種臨床性狀有關，如智力缺陷、兒童白血病、免疫缺陷、低血壓等。但與21號染色體相關的miRNA還有很多，因此，研究這些miRNA，特別是與唐氏綜合征特異性相關的miRNA具有重要的研究價值。

發明內容

基于此，有必要提供一種與唐氏綜合征21號染色體相關的miRNA、基因、篩選方法和應用。

一種與唐氏綜合征21號染色體相關的miRNA基因，具有如SEQ?ID?NO.1的核苷酸序列。

一種與唐氏綜合征21號染色體相關的miRNA的前體，具有如SEQ?ID?NO.2的核苷酸序列。

一種與唐氏綜合征21號染色體相關的miRNA，具有如SEQ?ID?NO.3的核苷酸序列。

上述miRNA、其基因及其前體基因在制備診斷或檢測唐氏綜合征試劑中的應用。

上述miRNA、其基因及其前體基因在制備診斷或檢測唐氏綜合征基因檢測芯片中的應用。

一種唐氏綜合征21號染色體相關miRNA的篩選方法，包括如下步驟：

分別采集唐氏綜合征胎兒和正常胎兒的臍帶血單個核細胞樣品；

提取所述樣品中的總RNA，用變性聚丙烯胺凝膠電泳分離回收長度不大于30個核苷酸的小RNA，在T4RNA連接酶的作用下，在回收的小RNA的5’端加上如SEQ?ID?NO.4的核苷酸序列接頭，3’端加上如SEQ?ID?NO.5的核苷酸序列接頭，經TBE聚丙烯胺凝膠電泳純化后，經Solexa小RNA反轉錄引物和PCR擴增后制成小RNA的cDNA文庫，再使用TBE聚丙烯胺凝膠電泳對所述cDNA文庫進行純化并進行測序分析；

對測序后所得的小RNA分子進行去接頭和去污染處理，并從中篩選出長度為18~30nt的核苷酸序列，用SOAP軟件將所得序列與人全基因組序列進行比對分析，將匹配上的序列按照GenBank>Rfam>miRBase17.0>repeat>exon>intron的優先級順序進行分類注釋，然后將intron和未比對上序列的小RNA分子序列作為新miRNA的數據源，用MIREAP和MiPred兩種軟件對所述新miRNA所在的染色體進行分析，得到所述唐氏綜合征21號染色體相關miRNA。

上述唐氏綜合征21號染色體相關miRNA或其前體是與唐氏綜合征患者特異性相關的miRNA，進一步研究發現，其與基因的表達、細胞分化的調節、胚胎形態的發生和心臟的發育有關。因此，該新的miRNA的發現，為進一步研究21號染色體的功能，探索唐氏綜合征患者新的治療靶點提供了實驗理論基礎和新的方向，并可應用在制備診斷或檢測唐氏綜合征患者試劑的領域，為唐氏綜合征疾病的診斷和檢測提供簡便的手段。

附圖說明

圖1為一實施方式的唐氏綜合征胎兒的臍帶血染色體核型分析結果圖；

圖2為正常胎兒的臍帶血染色體核型分析結果圖；

圖3為miR-nov21在21號染色體上的座位分析圖。

具體實施方式

下面主要結合具體實施例和附圖對唐氏綜合征21號染色體相關miRNA、基因、篩選方法和應用作進一步詳細的說明。

一實施方式的篩選方法、結果及相關檢測包括如下步驟：

1、篩選

1.1、樣本收集及胎兒臍帶血的采集和保存