[發(fā)明專利]唐氏綜合征21號染色體相關(guān)miRNA、基因、篩選方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210555209.5
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103045596A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐勇;李武縣;戴勇
• 申請（專利權(quán)）人: 徐勇
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

1.一種與唐氏綜合征21號染色體相關(guān)的miRNA基因，具有如SEQ?ID?NO.1的核苷酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的miRNA基因在制備診斷或檢測唐氏綜合征試劑中的應(yīng)用。

3.如權(quán)利要求1所述的miRNA基因在制備診斷或檢測唐氏綜合征基因檢測芯片中的應(yīng)用。

4.一種與唐氏綜合征21號染色體相關(guān)的miRNA的前體，具有如SEQ?IDNO.2的核苷酸序列。

5.如權(quán)利要求1所述的miRNA的前體在制備診斷或檢測唐氏綜合征試劑中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求1所述的miRNA的前體在制備診斷或檢測唐氏綜合征試劑中的應(yīng)用。

7.一種與唐氏綜合征21號染色體相關(guān)的miRNA，具有如SEQ?ID?NO.3的核苷酸序列。

8.如權(quán)利要求1所述的miRNA在制備診斷或檢測唐氏綜合征試劑中的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求1所述的miRNA在制備診斷或檢測唐氏綜合征基因檢測芯片中的應(yīng)用。

10.一種唐氏綜合征21號染色體相關(guān)miRNA的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

分別采集唐氏綜合征胎兒和正常胎兒的臍帶血單個核細(xì)胞樣品；

提取所述樣品中的總RNA，用變性聚丙烯胺凝膠電泳分離回收長度不大于30個核苷酸的小RNA，在T4RNA連接酶的作用下，在回收的小RNA的5’端加上如SEQ?ID?NO.4的核苷酸序列接頭，3’端加上如SEQ?ID?NO.5的核苷酸序列接頭，經(jīng)TBE聚丙烯胺凝膠電泳純化后，經(jīng)Solexa小RNA反轉(zhuǎn)錄引物和PCR擴(kuò)增后制成小RNA的cDNA文庫，再使用TBE聚丙烯胺凝膠電泳對所述cDNA文庫進(jìn)行純化并進(jìn)行測序分析；

對測序后所得的小RNA分子進(jìn)行去接頭和去污染處理，并從中篩選出長度為18~30nt的核苷酸序列，用SOAP軟件將所得序列與人全基因組序列進(jìn)行比對分析，將匹配上的序列按照GenBank>Rfam>miRBase17.0>repeat>exon>intron的優(yōu)先級順序進(jìn)行分類注釋，然后將intron和未比對上序列的小RNA分子序列作為新miRNA的數(shù)據(jù)源，用MIREAP和MiPred兩種軟件對所述新miRNA所在的染色體進(jìn)行分析，得到所述唐氏綜合征21號染色體相關(guān)miRNA。