[發明專利]一種失憶性貝毒分子印跡整體柱及其應用

有效

• 申請號: 201210554663.9
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103884802A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 張麗華;張曉林;楊開廣;黃大亮;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/56
• 分類號: G01N30/56
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明屬于高分子材料制備技術及其在貝類毒素分離分析中的應用，具體的說涉及一種新型貝類毒素的分子印跡整體柱。

背景技術

分子印跡技術是指對特定目標分子(模板分子)及其結構類似物具有特異性識別的聚合物的制備與應用技術。分子印跡聚合物(Molecularly?imprinted?polymers，MIPs)的制備一般采用本體聚合法，得到的聚合產物經研磨、過篩后在一定的溶劑條件下充分洗滌除去模板分子、致孔劑和未反應的單體等物質，進而得到對模板分子具有特殊識別作用的聚合物材料。該聚合物在復雜的體系中能選擇性地識別模板分子，并具有抗惡劣環境能力強、穩定性好、使用壽命長等優點，已廣泛用于樣品前處理色譜分析。

整體柱，又稱為棒狀柱，是一種用有機或無機聚合方法在色譜柱內進行原位聚合的連續床固定相。整體柱具有內部結構均勻、滲透率高、易改性和傳質速率快等優點，可解決填充色譜柱空間占用率低、傳質速率慢、柱負壓高、色譜峰拖尾嚴重等問題，被譽為第4代色譜固定相。

基于分子印跡聚合物的選擇識別能力和整體柱的諸多優點，將二者相結合制備分子印跡整體柱(Molecularly?imprinted?monolithic?colunln，MIPMC)成為必然的發展趨勢。作為一種新型的固相萃取材料和色譜固定相，分子印跡整體柱已被廣泛用于環境、生物、醫藥分析等領域。

發明內容

本發明的目的是實現失憶類貝毒的特異性富集與檢測。提供一種失憶類貝類毒素整體柱的制備方法，以及在高效液相色譜中失憶類貝毒的快速富集與檢測。

在毛細管柱內制備分子印跡整體柱，并在液相色譜中實現了失憶類貝毒的快速富集與檢測，該方法包括以下步驟：

（1）將軟骨藻酸標準品溶解在二甲亞砜溶液中，加入功能單體、交聯劑、致孔劑，超聲混合，通氮除氧，靜置至少20min以形成穩定的復合物。

（2）加入引發劑占溶液總重量的0.5%～5%，超聲溶解。

（3）將（2）灌注在經γ-(甲基丙烯酰氧基)-三甲氧基硅烷修飾的25～250μmid的石英毛細管中，封端。60～70℃水浴中聚合12-16小時

（4）將印跡柱連接到高效液相色譜上，利用溶劑沖洗致孔劑與模板分子，便可得到具有良好印跡效果的整體柱。

（5）通過高效液相色譜，使用印跡柱作為捕集柱與分析柱，實現貝類毒素的快速富集與檢測。

其中：

（1）所述功能單體為甲基丙烯酸、甲基丙烯酰胺的混合物，其物質量之比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9:或0:10。

（2）所述的致孔劑為十二醇、1,4-丁二醇的混合物，其物質量之比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9:或0:10。

（3）所述模板分子所占單體物質量的比例為1%、2%、5%、10%、20%，所用經經γ-(甲基丙烯酰氧基)-三甲氧基硅烷修飾的毛細管柱為25μm、50μm、75μm、100μm、150μm、200μm、250μm，聚合溫度為60～70℃水浴，印跡整體柱長度5cm-20cm。

本發明的優點在于：在石英毛細管柱內制備了失憶類貝毒的分子印跡整體柱，分析速度快，溶劑用量少，分子識別性能好。

附圖說明

圖1為實施例1整體柱掃描電鏡圖。

圖2為實施例1印跡整體柱柱壓與流速關系圖（良好的線性關系說明了整體材料內部結構均勻）。

圖3為實施例1分子印跡柱（MIP）較非分子印跡柱（NIP）不僅能夠更強的保留鼠毒素中提取出的貝類毒素（APS），還能將鼠毒素中提取出的貝類毒素（APS）進行手性拆分，分離度（R）=2.1。

具體實施方式

實例1

（1）首先將模板分子軟骨藻酸0.1μmol，甲基丙烯酰胺1.5μmol，甲基丙烯酸0.5μmol，十二醇、1,4-丁二醇17mg，哌嗪雙丙烯酰胺1.1μmol，二甲亞砜為溶劑，偶氮二異丁腈0.04mg，超聲溶解混勻，通氮除氧，灌注在經過γ-(甲基丙烯酰氧基)-三甲氧基硅烷修飾的25μm內徑的石英毛細管中，封端。60～70℃水浴中聚合12小時。聚合反應完成后采用高壓液相色譜泵沖洗未反應的單體和模板分子。

實例2

（2）加入致孔劑（十二醇、1,4-丁二醇，質量比10:0）其他同實施例1，可得MIP2。

實例3

（3）加入致孔劑（十二醇、1,4-丁二醇，質量比9:1）其他同實施例1，可得MIP3。