[發(fā)明專利]一種失憶性貝毒分子印跡整體柱及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210554663.9
• 申請(qǐng)日: 2012-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN103884802A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗華;張曉林;楊開廣;黃大亮;張玉奎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): G01N30/56
• 分類號(hào): G01N30/56
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于高分子材料制備技術(shù)及其在貝類毒素分離分析中的應(yīng)用，具體的說涉及一種新型貝類毒素的分子印跡整體柱。

背景技術(shù)

分子印跡技術(shù)是指對(duì)特定目標(biāo)分子(模板分子)及其結(jié)構(gòu)類似物具有特異性識(shí)別的聚合物的制備與應(yīng)用技術(shù)。分子印跡聚合物(Molecularly?imprinted?polymers，MIPs)的制備一般采用本體聚合法，得到的聚合產(chǎn)物經(jīng)研磨、過篩后在一定的溶劑條件下充分洗滌除去模板分子、致孔劑和未反應(yīng)的單體等物質(zhì)，進(jìn)而得到對(duì)模板分子具有特殊識(shí)別作用的聚合物材料。該聚合物在復(fù)雜的體系中能選擇性地識(shí)別模板分子，并具有抗惡劣環(huán)境能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、使用壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛用于樣品前處理色譜分析。

整體柱，又稱為棒狀柱，是一種用有機(jī)或無機(jī)聚合方法在色譜柱內(nèi)進(jìn)行原位聚合的連續(xù)床固定相。整體柱具有內(nèi)部結(jié)構(gòu)均勻、滲透率高、易改性和傳質(zhì)速率快等優(yōu)點(diǎn)，可解決填充色譜柱空間占用率低、傳質(zhì)速率慢、柱負(fù)壓高、色譜峰拖尾嚴(yán)重等問題，被譽(yù)為第4代色譜固定相。

基于分子印跡聚合物的選擇識(shí)別能力和整體柱的諸多優(yōu)點(diǎn)，將二者相結(jié)合制備分子印跡整體柱(Molecularly?imprinted?monolithic?colunln，MIPMC)成為必然的發(fā)展趨勢(shì)。作為一種新型的固相萃取材料和色譜固定相，分子印跡整體柱已被廣泛用于環(huán)境、生物、醫(yī)藥分析等領(lǐng)域。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是實(shí)現(xiàn)失憶類貝毒的特異性富集與檢測(cè)。提供一種失憶類貝類毒素整體柱的制備方法，以及在高效液相色譜中失憶類貝毒的快速富集與檢測(cè)。

在毛細(xì)管柱內(nèi)制備分子印跡整體柱，并在液相色譜中實(shí)現(xiàn)了失憶類貝毒的快速富集與檢測(cè)，該方法包括以下步驟：

（1）將軟骨藻酸標(biāo)準(zhǔn)品溶解在二甲亞砜溶液中，加入功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑，超聲混合，通氮除氧，靜置至少20min以形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

（2）加入引發(fā)劑占溶液總重量的0.5%～5%，超聲溶解。

（3）將（2）灌注在經(jīng)γ-(甲基丙烯酰氧基)-三甲氧基硅烷修飾的25～250μmid的石英毛細(xì)管中，封端。60～70℃水浴中聚合12-16小時(shí)

（4）將印跡柱連接到高效液相色譜上，利用溶劑沖洗致孔劑與模板分子，便可得到具有良好印跡效果的整體柱。

（5）通過高效液相色譜，使用印跡柱作為捕集柱與分析柱，實(shí)現(xiàn)貝類毒素的快速富集與檢測(cè)。

其中：

（1）所述功能單體為甲基丙烯酸、甲基丙烯酰胺的混合物，其物質(zhì)量之比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9:或0:10。

（2）所述的致孔劑為十二醇、1,4-丁二醇的混合物，其物質(zhì)量之比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9:或0:10。

（3）所述模板分子所占單體物質(zhì)量的比例為1%、2%、5%、10%、20%，所用經(jīng)經(jīng)γ-(甲基丙烯酰氧基)-三甲氧基硅烷修飾的毛細(xì)管柱為25μm、50μm、75μm、100μm、150μm、200μm、250μm，聚合溫度為60～70℃水浴，印跡整體柱長(zhǎng)度5cm-20cm。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：在石英毛細(xì)管柱內(nèi)制備了失憶類貝毒的分子印跡整體柱，分析速度快，溶劑用量少，分子識(shí)別性能好。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1整體柱掃描電鏡圖。

圖2為實(shí)施例1印跡整體柱柱壓與流速關(guān)系圖（良好的線性關(guān)系說明了整體材料內(nèi)部結(jié)構(gòu)均勻）。

圖3為實(shí)施例1分子印跡柱（MIP）較非分子印跡柱（NIP）不僅能夠更強(qiáng)的保留鼠毒素中提取出的貝類毒素（APS），還能將鼠毒素中提取出的貝類毒素（APS）進(jìn)行手性拆分，分離度（R）=2.1。

具體實(shí)施方式

實(shí)例1

（1）首先將模板分子軟骨藻酸0.1μmol，甲基丙烯酰胺1.5μmol，甲基丙烯酸0.5μmol，十二醇、1,4-丁二醇17mg，哌嗪雙丙烯酰胺1.1μmol，二甲亞砜為溶劑，偶氮二異丁腈0.04mg，超聲溶解混勻，通氮除氧，灌注在經(jīng)過γ-(甲基丙烯酰氧基)-三甲氧基硅烷修飾的25μm內(nèi)徑的石英毛細(xì)管中，封端。60～70℃水浴中聚合12小時(shí)。聚合反應(yīng)完成后采用高壓液相色譜泵沖洗未反應(yīng)的單體和模板分子。

實(shí)例2

（2）加入致孔劑（十二醇、1,4-丁二醇，質(zhì)量比10:0）其他同實(shí)施例1，可得MIP2。

實(shí)例3

（3）加入致孔劑（十二醇、1,4-丁二醇，質(zhì)量比9:1）其他同實(shí)施例1，可得MIP3。