[發明專利]6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法

有效

• 申請號: 201210554535.4
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103014080A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 樂庸堂;鞠鑫;梁長輝;莊繼昌
• 申請（專利權）人: 蘇州漢酶生物技術有限公司
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;汪青

1.?一種6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其以6-氰基-（5R）-羥基-3-氧代己酸叔丁酯為底物，該底物在生物催化劑、輔因子和輔因子再生系統的存在下發生還原反應生成6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯，其特征在于：所述的生物催化劑為酮還原酶，所述的輔因子再生系統包括葡萄糖和葡萄糖脫氫酶，所述的還原反應在pH為6~8的水相緩沖液中進行，在起始時的反應體系中，所述的底物6-氰基-（5R）-羥基-3-氧代己酸叔丁酯的濃度為350~400?mg/mL，所述的酮還原酶與所述的底物6-氰基-（5R）-羥基-3-氧代己酸叔丁酯的質量比為0.005~0.04:1。

2.?根據權利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其特征在于：在起始時的反應體系中，所述的輔因子：所述的葡萄糖：所述的葡萄糖脫氫酶;所述的6-氰基-（5R）-羥基-3-氧代己酸叔丁酯的質量比為0.0005~0.002：0.9~1.8：0.01~0.04：1。

3.?根據權利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其特征在于：所述的輔因子為NAD/NADH或NADP/NADPH。

4.?根據權利要求3所述的6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其特征在于：所述的輔因子為NADP/NADPH。

5.?根據權利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其特征在于：所述的水相緩沖液為三乙醇胺鹽酸緩沖溶液。

6.?根據權利要求1所述的6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其特征在于：所述的還原反應在pH為7.0的水相緩沖液中進行。

7.?根據權利要求1或2所述的6-氰基-（3R,5R）-二羥基己酸叔丁酯的生物制備方法，其特征在于：所述的制備方法的實施過程如下：在反應容器中依次加入葡萄糖、所述的水相緩沖液，攪拌均勻，繼續加入底物6-氰基-（5R）-羥基-3-氧代己酸叔丁酯，攪拌均勻，用氫氧化鈉溶液調節pH6~8，再繼續加入葡萄糖脫氫酶和酮還原酶，用氫氧化鈉溶液調節pH6~8，再加入所述的輔因子，用氫氧化鈉溶液維持pH6~8，攪拌反應，利用LC-MS檢測反應進程，待轉化率達90~99%時，結束反應。