[發明專利]雞腸道抗菌肽的提取方法

無效

• 申請號: 201210553288.6
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103880917A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 張述智;夏偉;朱紹輝;張浩;王曉麗;徐權汗;李之詳;許團輝
• 申請（專利權）人: 青島中仁藥業有限公司
• 主分類號: C07K2/00
• 分類號: C07K2/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16
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• 代理人: 暫無信息

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技術領域

本發明屬于抗菌肽的提取方法，具體涉及一種雞腸道抗菌肽的提取方法。

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背景技術

抗菌肽原指昆蟲體內經誘導而產生的一類分子量在4KD左右，具有抗菌活性的堿性多肽物質。迄今為止，在不同動物組織中已發現了很多具有抗菌作用的蛋白質和多肽，已有70多種抗菌多肽的結構被測定，抗菌肽的概念得到了極大的擴展。

抗菌肽是生物體內誘導表達具有廣譜抗菌活性的小分子多肽，這些多肽是生物體非專一性的免疫應答產物，是生物體內免疫系統的重要成分。最近研究發現，抗菌肽在機體腸道黏膜天然免疫中具有特殊意義，是抗菌免疫的直接效應分子，消化道抗菌肽主要由黏膜上皮細胞產生，在保護整個消化道黏膜完整，調節微生物區系平衡等方面發揮重要作用。目前提取抗菌肽的方法為硫酸銨沉淀法，由于腸道中含雜蛋白種類繁多，抗菌肽在生物體組織中含量較低，分離和純化比較困難，硫酸銨沉淀法比較復雜。

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發明內容

為了克服現有技術領域存在的上述問題，本發明的目的在于，提供一種雞腸道抗菌肽的提取方法，解決目前提取抗菌肽的方法比較復雜，分離和純化比較困難的問題。

本發明提供的雞腸道抗菌肽的提取方法，它包括如下具體步驟：

（1）????取腸黏膜和菌株：取某雞場飼養的60日齡三黃雞的雞腸黏膜、大腸桿菌菌株；

（2）????抗菌肽粗制品的制備：取新鮮雞腸黏膜用滅菌生理鹽水沖洗，經組織搗碎機搗碎后按1：1比例加入5%乙酸，100℃水浴10min，迅速冷卻后4℃、8000r/min離心30min，取上清超聲波裂解30s，4℃攪拌浸提24h后重復上述離心過程，取上清，調整pH7.0值，再次離心，上清液冷凍干燥；

（3）????抗菌肽粗制品的純化：將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱，用0.1mol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，恒流泵的速度為3×1，紫外檢測儀檢測其在280nm處的吸光值，記錄儀記錄，量程200mV，紙速度為6cm/h，自動部分收集器收集，每管約2ml，檢測各收集管洗脫液對大腸桿菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脫液，用截留分子量為l0KD的超濾離心管于5000g條件下離心30min，有抑菌活性的濾過過濾層析與超濾離心，將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱，用0.1mol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，物冷凍干燥，-20℃保存。

本發明提供的雞腸道抗菌肽的提取方法，其有益效果在于，該提取方法簡單易懂，提取的抗菌肽廣泛存在于生物體中，具有抗菌、抗病毒、殺寄生蟲、抗腫瘤等活性，是先天性免疫系統極其重要的組成成分，可以抵抗外來微生物的入侵。

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具體實施方式

下面結合實施例，對本發明提供的雞腸道抗菌肽的提取方法，進行詳細的說明。

實施例

本實施例的雞腸道抗菌肽的提取方法，它包括如下具體步驟：

（1）????取腸黏膜和菌株：取某雞場飼養的60日齡三黃雞的雞腸黏膜、大腸桿菌菌株；

（2）????抗菌肽粗制品的制備：取新鮮雞腸黏膜用滅菌生理鹽水沖洗，經組織搗碎機搗碎后按1：1比例加入5%乙酸，100℃水浴10min，迅速冷卻后4℃、8000r/min離心30min，取上清超聲波裂解30s，4℃攪拌浸提24h后重復上述離心過程，取上清，調整pH7.0值，再次離心，上清液冷凍干燥；

（3）????抗菌肽粗制品的純化：將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱，用0.1mol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，恒流泵的速度為3×1，紫外檢測儀檢測其在280nm處的吸光值，記錄儀記錄，量程200mV，紙速度為6cm/h，自動部分收集器收集，每管約2ml，檢測各收集管洗脫液對大腸桿菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脫液，用截留分子量為l0KD的超濾離心管于5000g條件下離心30min，有抑菌活性的濾過過濾層析與超濾離心，將上清液上樣于SephadexG-50過濾層析柱，用0.1mol/L乙酸鈉溶液，pH7.0進行洗脫，物冷凍干燥，-20℃保存。