[發明專利]5-甲基蜂蜜曲菌素的制備方法

有效

• 申請號: 201210550314.X
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN103333150A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 陳建;逯振宇;李福;朱方劍;林麗萍;姚瑤;秦序鋒;潘旖;泮燦輝
• 申請（專利權）人: 浙江佐力藥業股份有限公司
• 主分類號: C07D311/76
• 分類號: C07D311/76
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及中藥有效成分的提取與分離方法，尤其涉及一種從烏靈菌粉中提取分離的有效成分化合物的制備方法。

背景技術

中藥有效成分的提取、分離是實現中藥現代化的關鍵步驟，如何在尊重中醫藥傳統的基礎上，完成中藥有效成分的提取分離，是一個一直困繞廣大中醫藥工作者的問題。烏靈菌粉是浙江佐力藥業股份有限公司利用現代生物發酵技術，從天然烏靈參中分離菌種，經過發酵而得的國家一類新藥，化學成分主要含有腺苷為主的核苷類物質、氨基酸、異黃酮、微量元素、維生素等營養物質。烏靈膠囊是純烏靈菌粉制劑，有補腎健腦、養心安神功效，臨床上用于神經衰弱的心腎不交證，癥見心煩焦慮，失眠多夢，入睡困難，多夢驚恐，心悸，健忘，頭暈耳鳴等。

近年來隨著對烏靈菌粉的化學成分與藥理藥效的深入探討，證明其中所含5-methylmellein（5-甲基蜂蜜曲菌素）是其抗癌活性的物質基礎。從文獻檢索的結果來看，目前尚無該方面的研究報道。中藥烏靈菌粉是名貴中藥材，如何更好地提高5-methylmellein的提取率，減少有效成分的損失，對于降低科學研究成本、開發具有藥用成本低、療效高、更具有實用意義的抗癌新藥具有重要的意義。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種5-甲基蜂蜜曲菌素的制備方法，該方法獲得的產品中有效成分含量高、質量穩定、色澤好。若以其為原料制成中藥制劑，將完全滿足現代化中藥的要求。

為了實現上述的目的，本發明采用了以下的技術方案：

5-甲基蜂蜜曲菌素的制備方法，該方法包括以下的步驟：

1）提取濃縮

取烏靈菌粉，置回流瓶中，加6-10倍量有機溶劑，加熱回流提取0.5~2小時，提1~3次，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至約原體積的0.1~0.2倍；

2）萃取濃縮

濃縮液置萃取漏斗中與石油醚按1:1~5的體積比混合，振搖提取3~6次，合并石油醚層，減壓濃縮至膏稠狀，再加乙醇溶解；

3）上柱

以柱層析硅膠為固定相，乙醇為流動相，洗脫，流速為0.5-1.5倍床體積/小時，收集綠色熒光部分的洗脫液；

4）重結晶

洗脫液減壓濃縮，并蒸干，加少量石油醚加熱溶解，放冷，置冰箱中析出結晶，再重結晶，得到白色結晶5-甲基蜂蜜曲菌素。

作為進一步改進，所述的步驟1）有機溶劑選用甲醇、?乙醇、正丁醇或乙酸乙酯。

作為進一步改進，所述的步驟3）原料重量與柱層析硅膠體積比為1：1~5。

作為進一步改進，所述的步驟3）柱層析硅膠直徑和柱高比為1：1~20。

作為進一步改進，所述的步驟3）柱層析硅膠的顆粒為200~300目。

本發明對烏靈菌粉中有效成分進行分離純化，烏靈菌粉中提取的有效成分5-甲基蜂蜜曲菌素具有廣譜的抗癌活性，5-Methylmellein對KB（人口腔上皮癌）、MG-63（人骨肉瘤細胞）、a549（肺腺癌）、Raji?（淋巴瘤細胞）、HeLa（?人宮頸癌）5種腫瘤細胞的IC₅₀分別為25μg/mL、35.7μg/mL、35.7μg/mL、18.5μg/mL、20.8μg/mL。可用于多種癌癥的治療。若以其為原料制成中藥制劑，將完全滿足現代化中藥的要求。為研究治療人口腔上皮癌、人骨肉瘤細胞、肺腺癌、淋巴瘤細胞、?人宮頸癌5種腫瘤的新制劑奠定基礎。

本發明的制備方法實現了僅“吸附-脫附”一步法，工藝簡單，得到高純度的化合物白色晶體5-甲基蜂蜜曲菌素。產品中有效成分含量高、質量穩定、色澤好。生產成本低、純度高、損失小，產品質量高。

附圖說明

圖1為本發明制備的5-甲基蜂蜜曲菌素的紅外色譜圖。

圖2為本發明5-甲基蜂蜜曲菌素的核磁氫譜圖。

具體實施方式

實施例1

取烏靈菌粉100g，置回流瓶中，加6倍量有機溶劑（甲醇、?乙醇、正丁醇、乙酸乙酯），加熱回流提取1小時，提2次，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至約原體積的九分之一。濃縮液置萃取漏斗中與石油醚1:1-5混合，振搖提取5次，合并石油醚層，減壓濃縮至膏稠狀，再加約600ml乙醇溶解。以柱層析硅膠（200~300目）為固定相，乙醇為流動相，流速為0.5倍床體積/小時，洗脫，收集綠色熒光部分的洗脫液。洗脫液減壓濃縮，并蒸干，加少量石油醚加熱溶解，放冷，置冰箱中析出結晶，再重結晶。得到白色結晶5-甲基蜂蜜曲菌素310mg,產率為0.031%，純度為95.4%。