[發明專利]水稻基因BADH2的定點敲除系統及其應用

有效

• 申請號: 201210548714.7
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN103013954A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 高彩霞;單奇偉;陳坤玲
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/63;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.水稻基因BADH2的定點敲除系統，為如下a）或b）或c）：

a）由T-BADH2b和T-BADH2a組成；

b）T-BADH2b；

c）T-BADH2a；

所述T-BADH2b為特異剪切所述水稻基因BADH2內靶序列B的轉錄激活子樣效應因子核酸酶；所述靶序列B由間隔序列b、位于所述間隔序列b?5’端的轉錄激活子樣效應因子核酸酶的模塊識別序列L-b和位于所述間隔序列b?3’端的轉錄激活子樣效應因子核酸酶的模塊識別序列R-b組成；所述間隔序列b為水稻基因BADH2中包含序列表序列1第1612位至第1617位的長為15—20的序列；所述模塊識別序列L-b的長為15—30bp，所述模塊識別序列R-b的長為15—30bp；

所述T-BADH2a為特異剪切所述水稻基因BADH2內靶序列A的轉錄激活子樣效應因子核酸酶；所述靶序列A由間隔序列a、位于所述間隔序列a?5’端的轉錄激活子樣效應因子核酸酶的模塊識別序列L-a和位于所述間隔序列a?3’端的轉錄激活子樣效應因子核酸酶的模塊識別序列R-a組成；所述間隔序列a為水稻基因BADH2中包含序列表序列1第298位至第303位的長為15—20bp的序列；所述模塊識別序列L-a的長為15—30bp，所述模塊識別序列R-a的長為15—30bp。

2.根據權利要求1所述的定點敲除系統，其特征在于：

所述靶序列B為序列表序列1的第1589位至第1640位的核苷酸序列；

和/或，所述靶序列A為序列表序列1的第273位至第324位的核苷酸序列。

3.根據權利要求1或2所述的定點敲除系統，其特征在于：

所述T-BADH2b由序列表序列2第7位至第2952位所示核苷酸序列和序列表序列2第3085位至第6018位所示核苷酸序列分別編碼的蛋白質組成；

和/或，所述T-BADH2a由序列表序列3第7位至第2952位所示核苷酸序列和序列表序列3第3085位至第6018位所示核苷酸序列分別編碼的蛋白質組成。

4.含有上述任一所述定點敲除系統編碼基因的表達盒、重組表達載體、重組菌或重組細胞系。

5.根據權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于：所述重組表達載體為pGW3-BADH2b和pGW3-BADH2a；

所述重組載體pGW3-BADH2b為在載體pGW3的玉米ubiquitin啟動子下游插入編碼所述T-BADH2b的基因的載體；

所述重組載體pGW3-BADH2a為在載體pGW3的玉米ubiquitin啟動子下游插入編碼所述T-BADH2a的基因的載體；

所述載體pGW3是將載體pMDC32中HindIII和Acc65Ⅰ位點間的片段替換為玉米ubiquitin啟動子的重組載體。

6.根據權利要求5所述的重組表達載體，其特征在于：所述編碼所述T-BADH2b的基因為序列表序列2所示基因；

所述編碼所述T-BADH2a的基因為序列表序列3所示的基因；

和/或，所述玉米ubiquitin啟動子的序列為序列表序列4的第7位至第1993位。

7.一種定點敲除水稻基因BADH2的方法，包括在水稻中表達權利要求1—3中任一所述定點敲除系統的步驟。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述T-BADH2b在水稻中表達是通過所述重組載體pGW3-BADH2b將編碼所述T-BADH2b的基因導入所述水稻中實現的；

所述T-BADH2a在水稻中表達是通過所述重組載體pGW3-BADH2a將編碼所述T-BADH2a的基因導入所述水稻中實現的。

9.根據權利要求1—3中任一所述的定點敲除系統或權利要求7—8中任一所述方法，其特征在于：所述水稻基因BADH2為序列表序列1所示基因。

10.權利要求1—3中任一所述的定點敲除系統或權利要求7—9中任一所述方法在提高水稻米香中的應用。