[發明專利]一種β-內酰胺抗生素中三乙胺殘留量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210548588.5
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN103018387A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 趙忠瓊;余佳;徐國熙;李明;楊蕾;梁隆;王利春;沈鑫;程志鵬
• 申請（專利權）人: 四川科倫藥物研究有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/60
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;杜朗宇

技術領域

本發明涉及一種β-內酰胺抗生素中三乙胺殘留量的檢測方法。

背景技術

三乙胺是β-內酰胺抗生素合成中廣泛使用的試劑，對呼吸道有強烈的刺激性，吸入后可引起肺水腫甚至死亡。相關毒理學資料：急性毒性：LD50460mg/kg(大鼠經口)，570mg/kg(兔經皮)；LC50?6000mg/m³，2小時(小鼠吸入)；刺激性：家兔經眼：250μg(24小時)，重度刺激。亞急性和慢性毒性：兔吸入420mg/m³，7小時/次，每周5次，6周，見肺充血、出血，支氣管周圍炎，心肌變性，肝腎充血、變性、壞死。生殖毒性：家兔經口最低中毒劑量(TDL0)：6900μg/kg(孕1～3天)，對發育有影響。鑒于三乙胺的安全性問題，根據EMEA相關規定，三乙胺在產品中的殘留量限度應為：≤320ppm，即0.032%。

殘留溶劑的測定方法一般采用氣相色譜法，進樣方式有頂空進樣和直接進樣兩種。頂空進樣可以避免樣品沉積在進樣口受高溫分解而污染進樣口，以及樣品的裂解產物在色譜系統中產生干擾峰。但是由于三乙胺的特殊性，在氣相的進樣管路特別是傳輸管線存在顯著的吸附，導致三乙胺殘留量無法有效檢測：檢出靈敏度很低（0.032%限度的三乙胺不能檢出），即使提高濃度后重現性也很差，出峰時間也不固定，主要原因在于三乙胺在管道反復吸附后緩慢洗脫。如果采用將樣品溶解后直接進樣，由于進樣口的高溫條件，青霉素、頭孢菌素以及大環內酯等抗生素樣品沉積在進樣口，由于本身性質不穩定，在進樣口的高溫條件下（進樣口溫度至少在100℃以上，以保證分析物能夠氣化分離檢測）樣品分解產生眾多干擾峰，掩蓋和干擾三乙胺的檢測。由于三乙胺的分子結構特點，也不適合其他分析檢測方法如HPLC、IC等。因此，低限度的三乙胺殘留量（0.032%以下）檢測一直是業內非常棘手的問題。

雖然目前有一些文獻報道用頂空氣相法測定頭孢或大環內酯抗生素中殘留的三乙胺，但如果不對進樣通道系統進行徹底改造（改成惰性管路），根本無法檢測0.032%限度的殘留量，然而對成套精密儀器管路的改造絕非易事。另外也有文獻報道用氯仿提取三乙胺后直接測定，但氯仿毒性較大，對操作者以及環境的污染都較大，氯仿提取后氯仿層在下面，分液取樣困難，而且氯仿出峰位置與三乙胺出峰臨近，高濃度的氯仿和殘留物都很有可能干擾微量三乙胺的檢測。

因此，目前急需一種能夠安全有效地檢測β-內酰胺抗生素中三乙胺殘留量的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從β-內酰胺抗生素中更好地檢測三乙胺殘留量的方法。

本發明提供了一種β-內酰胺抗生素中三乙胺殘留量的檢測方法，它是通過氣相色譜法進行測定的，具體操作如下：

（1）供試品溶液的制備：

取待測樣品，在氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上層溶液作為供試品溶液；

（2）標準溶液的制備：

取三乙胺，在氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上層溶液作為標準溶液；

（3）將供試品溶液、標準溶液分別注入氣相色譜儀中進行測定，其中，色譜條件如下：

進樣方式：直接進樣；

色譜柱：非極性、弱極性或中等極性填料的毛細管柱；

柱溫：30～50℃保持3～10min，按20～60℃/min升溫至200℃，保持2min；

檢測器溫度：150～250℃；

進樣口溫度：110～200℃。

上述方法中，采用甲苯為溶劑，其毒性較低，提取分離操作更方便，且在氣相色譜中不能干擾三乙胺出峰；該方法還采用直接進樣，可有效避免三乙胺在頂空進樣器中的殘留，檢測更準確；同時，在改變提取溶劑的情況下，必須采用上述色譜條件進行檢測，否則無法得到準確的檢測結果。

其中，步驟（1）中，待測樣品與甲苯的重量體積比為(0.5～2.0):(0.5～2.0)；步驟（2）中，三乙胺與甲苯的重量體積比為（1.5～6.0）×10^-4：(0.5～2.0)。

其中，步驟（3）中，所述色譜柱尺寸為(20～50)m×(0.32～0.5)mm×(0.25～0.5)μm。