[發(fā)明專利]豬圓環(huán)病毒的抗原和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原的重組蛋白及其制備方法與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210547915.5
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN103059142A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 付利芝;楊睿;周雪;沈克飛;楊柳;翟少欽;張素輝;王可甜
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市畜牧科學(xué)院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;A61K39/295;A61P31/14;A61P31/20
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11308
• 代理人: 秦力軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及動物重組疫苗。?

背景技術(shù)

免疫抑制性疾病除了本身的直接危害之外，更為重要的是造成免疫抑制，可使低致病性的病原體引起多種疾病綜合征發(fā)生，甚至達(dá)到難以控制的程度，還造成對疫苗接種反應(yīng)增強(qiáng)、副作用加大，或使免疫失敗和對治療無應(yīng)答。免疫抑制性病的危害對畜禽健康的威脅日益增加。當(dāng)前最常發(fā)生并危害嚴(yán)重的豬免疫抑制性疾病主要有豬繁殖與呼吸綜合征和圓環(huán)病毒II型感染。?

豬繁殖與呼吸綜合征(Porc?ine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS)由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起，主要特點(diǎn)為懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊化等嚴(yán)重的繁殖障礙以及仔豬與育肥豬出現(xiàn)呼吸道癥狀。該病1987年首發(fā)于美國，迅速散播遍及全球，并于1995年在我國暴發(fā)，給我國乃至世界養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV感染豬的巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，易感細(xì)胞主要是位于扁桃體、肺、淋巴結(jié)和脾臟的單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)等免疫器官。從很多臨床和實(shí)驗觀察，PRRSV能引起感染豬的免疫抑制，導(dǎo)致對繼發(fā)細(xì)菌感染的易感性。中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗室的研究結(jié)果表明，經(jīng)PRRSV感染的SPF豬，豬體對豬瘟弱毒疫苗會產(chǎn)生一定程度的不應(yīng)答。肺臟是PRRSV的原發(fā)性靶器官，肺泡巨噬細(xì)胞是其感染的靶細(xì)胞。試驗證明，PRRSV在巨噬細(xì)胞中復(fù)制，可直接或間接引起這些細(xì)胞的形態(tài)和功能改變甚至死亡，從而導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，引起免疫抑制。PRRSV引起機(jī)體的細(xì)胞免疫功能低下，而體內(nèi)高水平的病毒特異性抗體又不足以清除病毒，造成病毒在豬體內(nèi)的持續(xù)性感染。?

豬圓環(huán)病毒(porcine?circovirus，PCV)是至今發(fā)現(xiàn)最小的一種重要的動物病原微生物。PCV2具有致病性，主要引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(post-weaning?multisystemic?wasting?syndrome，PMWS)，育肥豬的皮炎與腎病綜合征(Porcine?dermatetitis?and?nephropathy?syndrome，PDNS)，母豬的繁殖障礙，新生仔豬的先天性震顫、腹瀉、增生性壞死性肺炎，是一種新的傳染病。1991年加拿大首次暴發(fā)該病，隨后10幾年內(nèi)，有20多個國家和地區(qū)都有該病的報道。按照血清學(xué)的觀點(diǎn)，PCV2分布全世界。由PCV2感染急性發(fā)病豬群死亡率為10％，種豬淘汰率5～10％，哺乳仔豬死淘率低于5％，若細(xì)菌等發(fā)生繼發(fā)感染，病死率可上升為25％。豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是新近確認(rèn)的豬重要病原體。該病主要進(jìn)行性消瘦和多系統(tǒng)病理損傷為特征，同時導(dǎo)致淋巴系統(tǒng)損傷和免疫缺陷，造成感染該病的豬群對其它病原的易感性增高。研究表明，PCV2具有免疫抑制特性，PCV2感染豬的淋巴細(xì)胞，循環(huán)B細(xì)胞和T細(xì)胞的數(shù)量下降，淋巴器官中的T、B淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，因此PCV2感染豬群由于免疫功能下降，使豬群對其它病原體的抵抗力大大降低。PCV2感染可以引起繼發(fā)性免疫缺陷，發(fā)病或感染豬至少存在短暫的不能激發(fā)有效的免疫應(yīng)答現(xiàn)象。迄今，PCV2感染和引起的疾病已呈全球分布。由PCV2感染引起的PMWS(斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征)于2002年在我國各地呈暴發(fā)流行，給國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，已成為我國規(guī)模化豬場危害養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要免疫抑制性疫病之一。因此，加強(qiáng)對PCV2感染的控制具有十分重要的實(shí)踐意義。?

在實(shí)際生產(chǎn)中，因這兩個病的感染導(dǎo)致其他疫苗免疫效果不理想、保護(hù)率較低、應(yīng)激反應(yīng)等造成的直接經(jīng)濟(jì)損失每年高達(dá)數(shù)千萬元人民幣，間接損失上億元人民幣。隨著生物技術(shù)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，生物工程產(chǎn)品在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用越來越多。生物工程技術(shù)在獸用生物制品的應(yīng)用主要體現(xiàn)在基因工程疫苗的開發(fā)與研究。以某些病毒或細(xì)菌的免疫原性基因為基礎(chǔ)，利用分子生物技術(shù)進(jìn)行基因克隆和蛋白表達(dá)，將表達(dá)蛋白作為免疫原，是疫苗研究的新途徑，為克服一些常規(guī)疫苗的缺陷帶來希望。?

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種重組蛋白及其制劑，該重組蛋白及其制劑是基于兩組抗原表位涉及制備的，具有免疫原性。?

本發(fā)明通過以下技術(shù)手段解決上述技術(shù)問題：?

重組蛋白，含有所述豬圓環(huán)病毒的抗原的表位和所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原的表位。?

進(jìn)一步，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。?

由所述的重組蛋白制備的疫苗，將重組蛋白進(jìn)行乳化后，得疫苗；優(yōu)選為濃度為80μg/mL的重組蛋白與乳化劑按體積比1∶1的比例混合后乳化。?