[發明專利]豬圓環病毒的抗原和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原的重組蛋白及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201210547915.5
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN103059142A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 付利芝;楊睿;周雪;沈克飛;楊柳;翟少欽;張素輝;王可甜
• 申請（專利權）人: 重慶市畜牧科學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;A61K39/295;A61P31/14;A61P31/20
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 秦力軍

1.重組蛋白，其特征在于：含有所述豬圓環病毒的抗原的表位和所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原的表位。

2.根據權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于：所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

3.權利要求1所述的重組蛋白的制備方法，其特征在于：具體包括以下步驟：

A目的片段的合成

將如SEQ?ID?NO：1所示的豬圓環病毒的抗原的表位對應的核苷酸序列和如SEQ?ID?NO：2所示的豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原的表位對應的核苷酸序列通過如SEQ?ID?NO：4所示的柔性的Linker相連，得如SEQ?ID?NO：5所示的目標片段；

B修飾與優化

將如SEQ?ID?NO：5所示的目標片段作適應宿主菌修飾，并添加酶切位點，得如SEQ?ID?NO：6所示的目標片段；

C重組載體

分別將如SEQ?ID?NO：6所示的目標片段和PGEX-4T-1載體分別進行Bamh?I和Not?I雙酶切后進行連接，得重組載體，并制備轉化子和提取重組質粒；

D誘導表達與提取

將重組質粒轉化至宿主菌誘導表達，并提取重組蛋白。

4.根據權利要求3所述的重組蛋白的制備方法，其特征在于：包涵體回收，溶解后進行SDS-PAGE電泳，切下目標條帶，回收濃縮后可得到80mg/mL的目的蛋白。

5.重組載體，其特征在于：所述重組載體為將如SEQ?ID?NO：6所示的核苷酸序列和PGEX-4T-1載體分別進行Bamh?I和Not?I雙酶切后進行連接而得的重組載體。

6.由權利要求1所述的重組蛋白制備的疫苗，其特征在于：將重組蛋白用弗氏佐劑進行乳化后，得疫苗。

7.權利要求1所述的重組蛋白在制備抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒、抗豬圓環病毒的疫苗中的應用。

8.豬圓環病毒的抗原和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原聯合在制備呼吸綜合征病毒、抗豬圓環病毒的疫苗中應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述豬圓環病毒的抗原含有如SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列，所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原含有如SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列。