[發(fā)明專利]一種利用離體葉片鑒定番茄黃化曲葉病毒抗性的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210546754.8 | 申請(qǐng)日： | 2012-12-17 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103026966A | 公開（公告）日： | 2013-04-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 金鳳媚;薛琳;薛俊;楊迎霞;吉立柱;郝志愚 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 天津市農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津市杰盈專利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱紅星 |
| 地址： | 300384 天*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 葉片 鑒定 番茄 黃化 病毒 抗性 方法 | ||
1.一種利用離體葉片鑒定番茄黃化曲葉病毒抗性的方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行：
（1）侵染性克隆菌液的培養(yǎng)：將含有病毒DNA-A侵染性克隆的農(nóng)桿菌LBA4404接種在含50?ug/mL?Kan和50?ug/mL?Rif的YEB液體培養(yǎng)基中，28℃，200?rpm振蕩培養(yǎng)48?h；
（2）菌液的收集：用5000rpm離心機(jī)離心收集菌體，用液體MS培養(yǎng)基重新懸浮菌體，調(diào)OD600值為0.5；其中所述的MS培養(yǎng)基配方如下：
含100uM乙酰丁香酮；
（3）葉片處理：取5-6片苗齡的番茄葉片，在無菌操作臺(tái)上用75%（V/V）的酒精表面消毒30?s，再用0.1%升汞（升汞即氯化汞）消毒3.5?min，無菌水沖洗5~6次，將葉片剪成1cm×2?cm大小的葉片塊；
（4）離體葉片接種：將剪好的長(zhǎng)方形葉片塊置于含有侵染性克隆的農(nóng)桿菌LBA4404中浸泡20min后，接種到MS培養(yǎng)基（含100uM乙酰丁香酮）上，25℃共培養(yǎng)2-3天，然后將葉片用滅菌水清洗3遍，再轉(zhuǎn)移到含有濃度為500mg/l頭孢霉素的MS固體培養(yǎng)基上，7天后進(jìn)行觀察和測(cè)量；所述的用滅菌水為內(nèi)含有500mg/l頭孢霉素的水。
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