[發明專利]一種在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法有效
| 申請號： | 201210545897.7 | 申請日： | 2012-12-14 |
| 公開（公告）號： | CN103529226A | 公開（公告）日： | 2014-01-22 |
| 發明（設計）人： | 黃雯;闕華勇;許飛;李莉;張國范 | 申請（專利權）人： | 中國科學院海洋研究所 |
| 主分類號： | G01N33/78 | 分類號： | G01N33/78;G01N30/02 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 李穎 |
| 地址： | 266071*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 貝類 幼蟲 定量 檢測 甲狀腺 激素 方法 | ||
1.一種在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法，其特征在于:
該方法包括如下步驟：
1）將幼蟲樣品用液氮研磨法研磨成粉末狀；
2）研磨后進行低溫干燥，分成AB兩部分分別用于以下步驟；
3）將A部分樣品準確稱量干重后，按固定比例加入0.01mol/L?NaOH溶液，2-8℃下充分浸潤1h以上提取甲狀腺激素；
4）8000-12000rpm離心5-10min，取上清；
5）取步驟4）中的上清，用于定量檢測甲狀腺激素的含量；即總甲狀腺素T4和總3，5，3′-三碘甲腺原氨酸T3；
6）將B部分樣品準確稱量干重后加入細胞裂解液和PMSF室溫放置1h以上，裂解細胞釋放蛋白；
7）將步驟6）中裂解細胞釋放蛋白用于檢測樣品中總蛋白含量；
8）將數據整合，計算出幼蟲中每克蛋白含甲狀腺激素x克，即xg/gprotein。
2.根據權利要求1所述在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法，其特征在于：步驟1）中所述的幼蟲樣品在液氮中冷凍成固體后，用研缽研磨成粉末狀。
3.根據權利要求1所述在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法，其特征在于：步驟2）中所述低溫干燥是指用冷凍干燥儀-20℃至-50℃避光條件下干燥8-12h至完全干燥。
4.根據權利要求1所述在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法，其特征在于：步驟3）中所述固定比例是指按照每1g干重中加入5ml的0.01mol/LNaOH溶液。
5.根據權利要求1所述在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺素的方法，其特征在于：步驟5）中所述定量檢測總的甲狀腺素的含量是采用羅氏2010全自動生化分析儀定量檢測甲狀腺素的含量。
6.根據權利要求1所述在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法，其特征在于：步驟6）中細胞裂解液和PMSF的加入量能夠使樣品完全裂解即可。
7.根據權利要求1所述在貝類幼蟲中定量檢測甲狀腺激素的方法，其特征在于：步驟7）中所述檢測樣品中總蛋白含量是采用BCA蛋白測定試劑盒檢測樣品中總蛋白含量。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國科學院海洋研究所，未經中國科學院海洋研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201210545897.7/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
