[發明專利]游離人絨毛膜促性腺激素β亞單位磁微粒化學發光法定量測定試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201210544698.4
• 申請日: 2012-12-16
• 公開（公告）號: CN103076458A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N21/76
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技術領域

本發明涉及免疫分析醫學領域，具體地提供了一種簡便、快速、靈敏度高、線性范圍寬、穩定性好的游離人絨毛膜促性腺激素β亞單位磁微粒化學發光法定量測定試劑盒及其制備方法?

背景技術

hCG是由胎盤絨毛膜的合體滋養層產生的一種糖蛋白，由α和β二個單位通過離子鍵和疏水鍵結合在一起。α亞單位是垂體前葉激素所共有，它與FSH、LH、TSH的α亞單位結構相似。β亞單位的結構與LH等的β亞單位不同，在免疫活性上可予區別。血中β亞單位大部分以全分子形式存在，游離態的β亞單位（F-hCGβ）占hCG的1～5%左右。血中游離態的β亞單位是在受孕后6～8天產生，50～80天達到高峰，以后平穩下降，直至孕18周左右穩定于一定濃度。?

唐氏綜合征又稱先天愚型，21-三體綜合征，是最常見的染色體疾病和弱智的病因，新生兒中發病率約為1/700左右。根據染色體核型的不同，唐氏綜合征分為單純21三體型、嵌合型和易位型三種類型。唐氏綜合征的發生起源于卵子或精子發生的減數分裂過程中染色體的不分離現象，通常是隨機發生的，約95%的不分離現象來源于母親，僅5%左右發生在精子發生期。其結果是21號染色體多了一條，多出的一條染色體因劑量效應破壞了正常基因組遺傳物質間的平衡，導致患兒智力低下，顱面部畸形及特殊面容，肌張力低下，多并發先天性心臟病，患者白血病的發病率為普通人群的10-20倍。生活難以自理，患者預后一般較差，50%左右于5歲前死亡。?

目前對唐氏綜合征缺乏有效的治療方法。通過孕早、中期檢測孕婦血中?PAPP-A,游離β-hCG,AFP等，結合B超檢查，可將約90%的唐氏綜合征檢測出來。對高風險胎兒，通過絨毛活檢或羊水穿刺或臍血穿刺等技術作染色體核型分析可以確診，然后流產處理。?

懷有唐氏綜合征（DS）胎兒的孕婦，一部分人其血清F-hCGβ水平呈強直性升高，平均MOM值為2.3～2.4MOM。F-hCGβ在孕早期和孕中期都處于高水平。妊娠中期DS孕婦血清F-hCGβ濃度比正常至少高2倍。F-hCGβ用于DS風險的評估，敏感期可從孕早?期到孕中期（7～20周）。?

目前用于檢測游離人絨毛膜促性腺激素β亞單位的免疫分析方法主要有酶聯免疫分析法、化學發光免疫分析法等。酶聯免疫分析法存在靈敏度低，線性范圍窄、不易實現全自動化等方法學限制因素。化學發光免疫分析法是在酶聯免疫分析法基礎上發展起來的一種免疫檢測技術，具有靈敏度高、檢測線性范圍寬、操作簡便，自動化程度高等優勢。目前化學發光免疫分析技術因其有上述諸多有點得到了廣泛的應用。?

然而，在實際的免疫檢測中，由于待測樣品中所含的雜質成分較多，一定程度上影響了檢測靈敏度和準確性，所以從復雜的樣品基質中快速分離、純化出目的待測物，是臨床檢驗工作者面臨的難題之一。磁微粒免疫檢測技術是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學偶聯等方法包被上具有特異性親和力的的抗體或抗原等各種免疫活性物質，具有分離速度快、效率高、可重復性好、操作簡單、不影響被分離細胞或其他生物材料的生物學性狀和功能等特點，在外加磁場作用下可定向運動，是的某些特殊成分得以分離、濃集或純化。?

磁分離化學發光免疫分析法綜合采用了目前國際上的兩大主流免疫分析尖端技術—懸浮磁微粒載體技術、化學發光檢測技術，使系統能夠充分滿足臨床對檢測結果的要求：?

1、檢測范圍寬：表面巨大的磁微粒免疫反應載體、靈敏穩定的堿性磷酸酶底物APCL-Ⅰ化學發光體系保證了寬的線性范圍。?

2、靈敏度高：APCL-Ⅰ發光系統，使檢測信號大為增強。檢測限可達10-19mol的水平；懸浮磁微粒比表面巨大，可有效捕獲樣品中的痕量待測物，提高檢測的靈敏度。?

3、特異性強：選用單克隆抗體，與潛在交叉物無明顯交叉反應?

4、快速準確：懸浮磁微粒作為反應載體，可發揮液相免疫反應的優點，保證免疫反應和發光反應迅速達到平衡，無需耗時等待；APCL-Ⅰ發光峰值到達時間短、峰值平臺穩定，使檢測快速、準確。?