[發(fā)明專利]一種人髓過氧化物酶化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210543251.5
• 申請(qǐng)日: 2012-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN103033624A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 單存海;潘學(xué)繼;王立凱;曹青;洪宇霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市協(xié)和醫(yī)藥科技集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明提供了一種人髓過氧化物酶化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

心血管疾病（Cardiovascular?disease，CVD）是一類嚴(yán)重危害人類生命和身體健康的高風(fēng)險(xiǎn)疾病。目前，已成為我國城市和農(nóng)村人口的第一大死因，也是造成死亡率最高的非傳染性疾病。WHO指出對(duì)CVD疾病的早期診斷和預(yù)防可有效降低臨床突發(fā)事件和過早死亡的發(fā)生。

近年來，多種心血管疾病標(biāo)志物相繼問世，由于大多數(shù)能夠反映心肌壞死損傷的指標(biāo)多在心肌發(fā)生實(shí)質(zhì)性損傷之后才被檢測(cè)到，在發(fā)病早期很難提供科學(xué)的預(yù)防依據(jù)。髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）是一種大量存在于嗜中性多核白細(xì)胞（粒細(xì)胞）的血紅素蛋白，其表達(dá)和活性增加促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成，可以誘發(fā)心血管功能障礙，進(jìn)而對(duì)心肌造成損傷。人體MPO的表達(dá)和釋放常在心肌損傷之前，并與其他心肌類標(biāo)志物無明顯相關(guān)性，因此對(duì)患者心血管疾病的早期診斷和療效觀察具有更加重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值。MPO被認(rèn)為是目前最有前景的心臟標(biāo)記物之一。已被證實(shí)患者血清中MPO濃度的升高可作為動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)，并預(yù)示著心肌梗死的早期風(fēng)險(xiǎn)。

近年來，用于臨床診斷領(lǐng)域的免疫分析方法主要有：放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫法、熒光免疫法及化學(xué)發(fā)光免疫法等。放射免疫法檢測(cè)靈敏度相對(duì)不高，又存在一定的放射性污染，已經(jīng)逐漸被替代；酶聯(lián)免疫法雖無放射性污染，但受影響因素多，很容易造成結(jié)果失真，準(zhǔn)確性較差；膠體金法檢測(cè)速度快，但是穩(wěn)定性和可靠性不理想；熒光法也存在著穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)。

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時(shí)間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項(xiàng)新的免疫測(cè)定技術(shù)。它將化學(xué)發(fā)光分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的高特異性相結(jié)合，與目前常用的其他免疫分析法相比具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)時(shí)間短、測(cè)量線性范圍寬、穩(wěn)定性好，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、使用簡便、安全、無放射性污染等諸多優(yōu)點(diǎn)，因此倍受人們的青睞，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于傳染性疾病、肥胖及相關(guān)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)、遺傳病、腫瘤的早期診斷、動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫等眾多領(lǐng)域。

目前，化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在人MPO免疫分析產(chǎn)品的應(yīng)用方面仍是空白。本發(fā)明所述試劑盒可供開放式化學(xué)發(fā)光分析儀使用，方法簡便快捷，成本低廉，易于在臨床診斷和科研工作中推廣使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種人髓過氧化物酶化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

一種人髓過氧化物酶化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑盒，包括以下組份：

1）人髓過氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品；

2）包被有人髓過氧化物酶單克隆抗體的載體；

3）酶標(biāo)記的人髓過氧化物酶的單克隆抗體；

4）上述酶所作用的化學(xué)發(fā)光底物；

5）濃縮洗滌液，

其中，所述包被有人髓過氧化物酶單克隆抗體的載體經(jīng)過以下步驟制備：

1）采用pH值為9.6的50mM碳酸鹽緩沖液為溶劑與人髓過氧化物酶單克隆抗體混合，配成濃度為5μg/mL的混合液，負(fù)載于載體上；

2）用pH值為7.3-7.5的PBS或用pH值為7.3-7.5的PBST清洗載體；

3）將pH值為7.2-7.5的封閉液負(fù)載于清洗后的載體上；所述封閉液用下述方法制成：取8gNaCl、1.43g無水Na₂HPO₄、0.24g無水KH₂PO₄、0.2g?KCl、10g?BSA、25g蔗糖及0.5mL?Proclin300，加水1000mL；

4）將封閉液倒掉，干燥，得到包被有人髓過氧化物酶單克隆抗體的載體。

人髓過氧化物酶標(biāo)準(zhǔn)品是用下述方法制成：將0.02mol/L，pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液與胎牛血清按體積比4:1的比例混合配制成基礎(chǔ)緩沖液，用基礎(chǔ)緩沖液將人髓過氧化物酶稀釋成濃度為0、25、64、160、400、1000ng/mL。

所述載體為微孔板、磁性顆粒、塑料管或塑料珠。

步驟3）用于標(biāo)記的酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。

所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾或異魯米諾，（金剛烷）-1，2-二氧乙烷、3-（2’-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-4-（3’-磷酰氧基）苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。