[發明專利]一種核酸適配體用于腫瘤細胞高靈敏檢測的電極修飾方法

無效

• 申請號: 201210542239.2
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103257167A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 彭睿;曲麗明
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

技術領域

本發明涉及一種電極修飾方法，具體涉及一種核酸適配體用于腫瘤細胞高靈敏檢測的電極修飾方法。

背景技術

?腫瘤一直威脅著人類的健康。然而，現在依然沒有有效的治療手段。其中最主要的原因是不能實現腫瘤的早期檢測，延誤了最佳的治療時間。因此，發展一種快速，靈敏，準確的檢測手段，對于腫瘤的治療至關重要。

?循環腫瘤細胞（CTC）?指自發或因診療操作進入外周血循環的腫瘤細胞，具有高度活力和高度轉移潛能，能在循環系統中存活并在合適的環境中增殖，導致腫瘤的復發和轉移。腫瘤轉移是癌癥最隱匿但也是最致命的問題。惡性腫瘤在發病早期即可出現腫瘤細胞的全身擴散，而血液傳播是惡性腫瘤轉移的重要途徑，CTC可以通過血液循環到達任何組織和器官。

?腫瘤細胞的檢測對于腫瘤的早期診斷、個體化治療及預后評估和監測等有重要意義，傳統CTC檢測技術瓶頸在于其在生理樣本中的含量低，樣本復雜度高，檢出率低、重復性及一致性差、無法達到自動化及標準化。故提高檢測的靈敏度以降低假陰性，增強特異性以降低假陽性對于循環腫瘤細胞的檢測尤為重要。

?由于CTC在血液樣本中的含量很低，所以為了提高檢測的靈敏度，通常需要首先富集CTC。目前檢測CTC的方法主要有兩類，依賴于單抗的免疫測定方法和依賴于PCR的檢測方法。但是傳統的檢測方法操作麻煩，成本較高，不能實現實時檢測，而且可能出現假陽性與假陰性。本發明發展的檢測CTC的方法，不需要選擇合適的細胞靶標，不需要富集腫瘤細胞，簡化了操作步驟，而且檢測時間短，檢測限低，方便操作，有望實現便攜式操作。

CTC檢測技術

1.?RT-PCR

RT-PCR通常被認為是最靈敏的檢測腫瘤相關靶標的方法?？梢栽?e7正常細胞中實現對一個腫瘤細胞的檢測。但是RT-PCR檢測方法需要裂解細胞，不能保持細胞完整的形態以及進一步分析。而且，RT-PCR檢測通常具有很高的假陽性。

2.?免疫細胞化學分析

免疫介導的檢測方法廣泛用于CTC檢測。但是選擇用于檢測的合適靶標依然是一個嚴峻的挑戰。免疫細胞化學分析通常耗時耗力，成本較高。

3.?流式細胞術

相對于核酸分析，流式細胞術的優勢在于細胞沒被破壞，可以進行細胞形態學和分子生物學的后續分析。但是不足之處是缺乏腫瘤細胞特異性抗體。

4.?CTC?chip

CTC?chip是一種先進的檢測CTC技術。在微柱上裝載相應的抗體，當血液流經時，陽性細胞粘附于微柱表面。此設備的檢測靈敏度很高，在所有腫瘤患者外周血中都可以檢測到CTC的存在。但是此設備成本較高，不易推廣使用。

發明內容

本發明的目的是優化電極表面的修飾，將兩種不同的核酸適配體（TLS1c和TLS11a）同時共價結合到電極表面，以此來檢測腫瘤細胞，提供一種核酸適配體用于腫瘤細胞高靈敏檢測的電極修飾方法。

為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明通過以下技術方案實現：

一種核酸適配體用于腫瘤細胞高靈敏檢測的電極修飾方法，包括以下步驟：

步驟1）電極表面的修飾