[發(fā)明專利]一種核酸適配體用于腫瘤細胞高靈敏檢測的電極修飾方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210542239.2
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103257167A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 彭睿;曲麗明
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

1.????一種核酸適配體用于腫瘤細胞高靈敏檢測的電極修飾方法，包括以下步驟：

步驟1）電極表面的修飾

玻碳電極依次用1μm,0.05μm三氧化二鋁粉末打磨，去除掉表面雜質(zhì)，然后分別在1:1HNO₃，丙酮，和雙蒸水超聲2分鐘；將電極在0.085mol/L?K₂Cr₂O₇和1.7mol/L?HNO₃溶液中，用1.5V恒電位氧化30s生成表面羧基；將氧化好的玻碳電極浸入含有0.02mol/L?EDC和0.01mol/L?NHS的0.02mol/L?PBS(pH=6.8)溶液中，在室溫活化30分鐘；將20μL?0.5*10^-5mol/L?15T-TLS1c（TTTTTTTTTTTTTTTACAGGAGTGATGGTTGTTATCTGGCCTCAGAGGTTCTCGGGTGTGGTCACTCCTG）和10μL?1*10^-5mol/L?oligo?dA的混合溶液，以及20μL?0.5*10^-5mol/L?15T-TLS11a??(ACAGCATCCCCATGTGAACAATCGCATTGTGATTGTTACGGTTTCCGCCTCATGGACGTGCTG)溶液，分別在95℃變性5分鐘，然后逐漸冷卻至室溫，形成正確的二級結(jié)構(gòu)；將變性-復(fù)性好的核酸適配體滴加到活化的電極表面，室溫干燥；用0.02mol/L?PBS(pH=6.8)溶液清洗電極表面，去除未共價結(jié)合的核酸適配體；修飾好的電極保存在TE緩沖溶液中備用；

步驟2）實驗樣品的處理

取1mL健康人的血液，4000rpm離心15min,去除血漿；用0.02?mol/L?PBS(pH=7.0)洗滌血細胞三次；用1?mL?0.02?mol/L?PBS(pH=7.0)重新懸浮血細胞；

步驟3）電極的封閉

將修飾好的電極在血細胞中4℃孵育45min；

步驟4）腫瘤細胞的檢測

向血液中逐漸加入BNL?1ME?A.7R.1(MEAR)細胞，修飾好的電極和MEAR細胞在4℃反應(yīng)15min，用循環(huán)伏安、差速脈沖伏安、交流阻抗的方法檢測腫瘤細胞。