[發(fā)明專利]一種體外誘導擴增NKT細胞的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210541319.6
• 申請日: 2012-12-13
• 公開（公告）號: CN102978160A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設計）人: 唐田娟;蘇國新;葉永清
• 申請（專利權）人: 上?？氯R遜生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 上海三方專利事務所 31127
• 代理人: 吳干權;錢品興

1.一種體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成：

a.IL-2和GM-CSF共培養(yǎng)DC細胞，

b.α-GalCer對DC細胞的負載，

c.用α-GalCer負載的DC細胞培養(yǎng)NKT細胞。

2.如權利要求1所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于所述的IL-2和GM-CSF共培養(yǎng)DC細胞由以下步驟組成：用淋巴細胞分離液分離初外周血單個核細胞，用1640培養(yǎng)液調(diào)整PBMC濃度為2~4×10⁶/mL，置于37℃、5%的CO₂培養(yǎng)箱，用1640培養(yǎng)液洗板2次，加入含有IL-2，GM-CSF的培養(yǎng)液，置于37℃、5%的CO₂培養(yǎng)箱2小時。

3.如權利要求1所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于所述的α-GalCer對DC細胞的負載由以下步驟組成：保存5天后，在培養(yǎng)的DC細胞中加入α-GalCer，24小時后收集細胞。

4.如權利要求1所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于α-GalCer負載的DC細胞培養(yǎng)NKT細胞由以下步驟組成：用含有IL-2、IL-15和α-GalCer的培養(yǎng)液調(diào)整洗板后的懸浮淋巴細胞濃度至1~2×10⁶?/ml，在37℃、5%的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天；在第3~4天進行補液及傳代；其中第0天、7天、14天加入DC細胞共培養(yǎng)，第21天收獲細胞。

5.如權利要求1或2或3所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于所述的IL-2的濃度為100U/ml。

6.如權利要求1或2或3所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于所述的GM-CSF濃度為50ng/ml。

7.如權利要求1或3所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于所述的α-Galcer濃度為100ng/ml。

8.如權利要求4所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于步驟（c）中，IL-2的濃度為50U/ml。

9.如權利要求4所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于步驟（c）中，IL-15的濃度為50ng/ml。

10.如權利要求4所述的體外誘導擴增NKT細胞的方法，其特征在于步驟（c）中，α-Galcer的濃度為50ng/ml-500ng/ml。