[發(fā)明專利]突變的A2M基因5端側(cè)翼區(qū)和3端非翻譯區(qū)及其檢測引物、試劑盒和檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210540797.5
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103103190A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃金明;王秀革;鞠志花;袁金鐸;仲躋峰
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛研究中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種突變的A2M基因5端側(cè)翼區(qū)和3端非翻譯區(qū)，及其檢測引物、試劑盒和檢測方法，以及在奶牛遺傳改良中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

奶牛乳腺炎是發(fā)生在乳腺組織的一種炎癥反應(yīng)，是奶牛飼養(yǎng)中最常見和最復(fù)雜的疾病，也是造成奶牛業(yè)損失最大的一種疾病(Seegers等，2003)。引起奶牛乳腺炎發(fā)生的主要原因是環(huán)境中的病原菌，如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌等。目前，奶牛乳腺炎的防治與預(yù)防措施主要是通過奶牛生產(chǎn)中抗生素的使用，但抗生素的應(yīng)用會帶來許多負面的影響，如病原菌耐藥性升高、乳品質(zhì)降低，并且沒有從根本上消除奶牛乳腺炎的發(fā)病率。

基因的單核苷酸突變對于基因的表達調(diào)控和功能活性有重要的作用，對個體的表型有重要的作用。若通過分子育種手段對奶牛乳腺炎抗性候選基因的分子標記進行選擇，同時對其進行功能性驗證，最終選擇功能性的位點進行奶牛遺傳育種，可改善奶牛抗乳腺炎能力，降低藥物的使用量，提高牛奶質(zhì)量，減少經(jīng)濟損失。

α2巨球蛋白（Alpha-2-macroglobulin，A2M）是在先天性免疫反應(yīng)中的一員(Armstrong等，1999)，它和C3、C4和C5一起同屬于α-巨球蛋白家族的成員(Levashina等,2001)。A2M是哺乳動物中的一種廣譜蛋白酶抑制劑，參與宿主防御機制，通過抑制侵入機體的寄生蟲和病原體釋放的多種蛋白酶與毒素，減少其對宿主的破壞，增強宿主的抗病力(Enghild等，1989；Armstrong，2006)。

單核苷酸突變可引起基因產(chǎn)物表達量或功能的改變，這在基因控制的表型多樣性上有重要的作用(Gruber等，2012)。基因5端啟動子區(qū)和3端非翻譯區(qū)都可調(diào)節(jié)基因的表達，其中5端啟動子區(qū)域內(nèi)的單核苷酸突變，可影響基因的轉(zhuǎn)錄活性；而3端非翻譯區(qū)的堿基突變可通過改變miRNA的結(jié)合能力從而影響基因的翻譯表達。單核苷酸突變是哺乳動物基因組最常見的變異類型，有報道它與包含奶牛乳腺炎癥在內(nèi)的很多疾病有關(guān)(Nicoloso,2010；Poletto，2012)。但是到目前為止，未有研究報道牛A2M基因的啟動子區(qū)和3端非翻譯區(qū)內(nèi)存在和奶牛乳腺炎有關(guān)的功能性SNPs。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種影響奶牛乳腺炎抗性的突變的A2M基因5端側(cè)翼區(qū)和3端非翻譯區(qū)，該突變可以作為奶牛乳腺炎抗性候選基因在篩選和鑒定奶牛是否具有乳腺炎抗性中進行應(yīng)用，本發(fā)明還提供了檢測該突變的引物、試劑盒和檢測方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種突變的A2M基因5端側(cè)翼區(qū)，序列如SEQ?ID?NO.8所示，與野生型A2M基因5端側(cè)翼區(qū)相比，其SNPs位點如下：g.-724A>G（對應(yīng)SEQ?ID?NO.8所示的序列中，相當于第1918位堿基A>G），g.-665G>A（對應(yīng)SEQ?ID?NO.8所示的序列中，相當于第1977位堿基為A），g.-535C>G（對應(yīng)SEQ?ID?NO.8所示的序列中，相當于第2107位堿基為C>G）和g.-520_-519insA（對應(yīng)SEQ?ID?NO.8所示的序列中，相當于第2122和2124位之間插入一個A），這4個SNPs位點完全連鎖。

一種突變的A2M基因3端非翻譯區(qū)，序列如SEQ?ID?NO.7所示，與野生型A2M基因3端非翻譯區(qū)相比，其SNP位點如下：c.4659_4661delC（對應(yīng)SEQ?ID?NO.7所示的序列中，相當于第501和502位之間刪除一個C），該SNP位點與權(quán)利要求1所述的5端側(cè)翼區(qū)的4個SNPs位點關(guān)聯(lián)。