[發明專利]突變的A2M基因5端側翼區和3端非翻譯區及其檢測引物、試劑盒和檢測方法

無效

• 申請號: 201210540797.5
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103103190A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 黃金明;王秀革;鞠志花;袁金鐸;仲躋峰
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院奶牛研究中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.一種突變的A2M基因5端側翼區，其特征在于：序列如SEQ?ID?NO.8所示，與野生型A2M基因5端側翼區相比，其單核苷酸多態位點如下：g.-724A>G，g.-665G>A，g.-535C>G和g.-520_-519insA，這4個SNPs位點完全連鎖。

2.一種突變的A2M基因3端非翻譯區，其特征在于：序列如SEQ?ID?NO.7所示，與野生型A2M基因3端非翻譯區相比，其SNP位點如下：c.4659_4661delC，該SNP位點與權利要求1所述的5端側翼區的4個SNPs位點關聯。

3.權利要求1所述的突變的A2M基因5端側翼區或/和權利要求2所述的3端非翻譯區作為奶牛乳腺炎抗性候選基因在篩選和鑒定奶牛是否具有乳腺炎抗性中的應用。

4.一種檢測權利要求1所述的A2M基因5端側翼區的引物，其特征在于：上游引物的序列如SEQ?ID?NO.1,下游引物的序列如SEQ?ID?NO.2。

5.一種檢測權利要求2所述的A2M基因3端非翻譯區的引物，其特征在于：上游引物的序列如SEQ?ID?NO.5所示,下游引物的序列如SEQ?ID?NO.6所示。

6.一種檢測權利要求2所述的A2M基因3端非翻譯區的試劑盒，其特征在于：包括：上、下游引物，10μmol/L；2×Taq?PCR?MasterMix；10×FastDigest酶切緩沖液；FastDigest限制性內切酶ScrFI；雙蒸水；2000bp?DNA?Ladder?Marker；其中，上游引物的序列如SEQ?ID?NO.5所示,下游引物的序列如SEQ?ID?NO.6所示；2×Taq?PCR?MasterMix是由MgCl₂（4mM）、dNTPs(0.4mM)、Taq?DNA?Polymerase（0.05units/μl）組成的。

7.權利要求4或5所述的引物或權利要求6所述的試劑盒在篩選或鑒定奶牛是否具有乳腺炎抗性中的應用。

8.一種篩選或鑒定奶牛是否具有乳腺炎抗性的方法，其特征在于：利用SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的引物對對待檢測奶牛的A2M基因3端非翻譯區進行擴增，得到的DNA擴增片段用ScrFI酶切，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測：若得到502bp和379bp兩條帶，則證明該待檢測奶牛的A2M基因3端非翻譯區為野生型；若得到881bp一條帶，則證明該待檢測奶牛的A2M基因3端非翻譯區為突變型；若得到881bp、502bp和379bp三條帶，則證明該待檢測奶牛的A2M基因3端非翻譯區為雜合型；突變型和雜合型的奶牛具有乳腺炎抗性。