[發明專利]一種新型高效合生素腸靶向微球膠囊及其制備方法

有效

• 申請號: 201210539339.X
• 申請日: 2012-12-13
• 公開（公告）號: CN103005157A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 彭慶付;孟玲琳;顧玉芹;王清偉
• 申請（專利權）人: 安徽省正大源飼料集團有限公司
• 主分類號: A23K1/16
• 分類號: A23K1/16;A23K1/00
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產權代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

1.一種新型高效合生素腸靶向微球膠囊，其特征在于，其組分為：30-40%的益生菌和60-70%的益生元；所述益生菌由40-50%的丁酸梭狀芽孢桿菌和50-60%的乳酸芽孢桿菌組成的混合物；所述的益生元由60-70%的啤酒酵母多糖和30-40%的硫酸化啤酒酵母多糖組成的混合物。

2.一種如權利要求1所述的新型高效合生素腸靶向微球膠囊的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

????（1）益生菌的制備

????①乳酸芽孢桿菌的制備

乳酸芽孢桿菌培養基為：酵母膏10g、蛋白胨10g、葡萄糖?6g、MgSO₄·7H₂O?1g、MnSO₄?0.05g、K₂HPO₄?2g，蒸餾水1L，PH=7.0-7.2，滅菌條件為120-125℃，20-30min；

第一步：取斜面上菌種接種入裝有乳酸芽孢桿菌培養基的試管中，35-38℃恒溫靜置厭氧培養20-24h，得到一級種子菌，取出放入冰箱保存；待用；

第二步：按乳酸芽孢桿菌培養基的3-5%的比例將一級種子菌接種到乳酸芽孢桿菌培養基內，得到二級種子菌；

第三步：按乳酸芽孢桿菌培養基的成分比例稱取各成分，倒入微生物發酵罐內，加水至20L，于110-120℃下高溫蒸汽滅菌20-30min，待其冷卻至35-40℃，按乳酸芽孢桿菌種培養基體積的5-10%的比例加入二級種子菌，攪拌均勻，進行發酵培養，發酵溫度35-45℃，發酵時間20-30h；

第四步：從微生物發酵罐內取出發酵液，待其冷卻至常溫后，在2500-3000r/min轉速下離心15-20min，去上清液，每千克濕菌體中加入10-20g海藻糖作為保護劑，再加入200-300g大孔淀粉進行吸附，攪拌均勻，在-35～-40℃下預凍1-2h，然后在真空度10.00-12.00Pa條件下干燥25-30h，粉碎研磨成粉末，備用；

②丁酸梭狀芽孢桿菌的制備

丁酸梭狀芽孢桿菌培養基為：酵母膏5g、蛋白胨10g、葡萄糖?10g、牛肉浸膏3g、硫酸銨1g、NaCl2g、磷酸氫二鉀4g、碳酸氫鈉1g、MnSO₄?0.2g%、MgSO₄·7H₂O?0.5g、CaCO₃?1g、蒸餾水1L，PH=6.8-7.0，滅菌條件為120-130℃，20-30min；

第一步：取斜面上菌種接種入裝有丁酸梭狀芽孢桿菌培養基的試管中，36-38℃恒溫靜置厭氧培養20-24h，得到一級種子菌，取出放入冰箱保存；待用；

第二步：按丁酸梭狀芽孢桿菌培養基的4-6%的比例將一級種子菌接種到丁酸梭狀芽孢桿菌培養基內，得到二級種子菌；

第三步：按丁酸梭狀芽孢桿菌培養基的成分比例稱取各成分，倒入微生物發酵罐內，加水至22L，于110-120℃下高溫蒸汽滅菌20-30min，待其冷卻至35-40℃，按丁酸梭狀芽孢桿菌種培養基體積的8-12%的比例加入二級種子菌，攪拌均勻，進行發酵培養，發酵溫度35-45℃，發酵時間32-40h；

第四步：從微生物發酵罐內取出發酵液，待其冷卻至常溫后，在2500-3000r/min轉速下離心15-20min，去上清液，用20-30%的牛乳汁作為保護劑將菌泥洗出，然后將其與含有明膠的包被液混合，均質包被，冷凍干燥，研磨成粉末，備用；

③啤酒酵母多糖的提取

　先對啤酒酵母泥進行預處理：用蒸餾水清洗，真空抽濾，再進行第二次水洗，放置0.5-1?h后，倒掉上清液，離心，加入兩倍酵母泥體積的0.5%碳酸氫鈉洗滌1-2?h，再水洗兩次，離心，棄上清液得到干凈的酵母；根據其含水量折算成干酵母重量,加入適量的水和食鹽使酵母和食鹽濃度均為8-10%，將溶液置于高壓均質機中,在溫度110-120℃、高壓60-70MPa的條件下均質2-3次，冷卻、高速離心，保留上清液，濃縮至原體積的1/4-1/5，：以95%乙醇作沉淀劑，沉淀10-12h，乙醇與上清液的體積比為2-3:1，沉淀用丙酮洗滌2次，用乙醚洗滌1次，最后將沉淀在30-40℃下干燥12-16h，即得啤酒酵母多糖；

④硫酸化修飾酵母多糖

按質量比2.0-4.0:1稱取三氧化硫和啤酒酵母多糖于反應釜中，加入20-30?mL吡啶溶解，開動攪拌機，溶解后，在60-70℃水浴反應2-3h，反應結束后冷卻至室溫，將反應液侵入蒸餾水中，用2.5?mol/L?NaOH調節pH值至7-8，離心棄不溶物，加入4-5倍體積的95%乙醇沉淀多糖析出沉淀，將沉淀溶于水，用蒸餾水透析36-48?h，濃縮，冷凍干燥，得硫酸化酵母多糖；

⑤合生素腸靶向微球膠囊的制備

采用流化床包膜法：將經冷凍干燥后的干菌粉與酵母多糖、硫酸化酵母多糖混合，然后將混合后的干粉加入流化床中，通過向上運動的熱空氣進行加熱，物料保持良好的懸浮狀態，選擇海藻酸鈉作為粘合劑通過噴霧系統噴入進行微囊制粒，密閉包裝，避光保存。