[發明專利]乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210537143.7
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN103864903A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 才蕾;任艷娜;唐時幸;王繼華
• 申請（專利權）人: 廣州萬孚生物技術股份有限公司
• 主分類號: C07K14/02
• 分類號: C07K14/02;C12N15/70;G01N33/68;G01N33/558;A61K39/29;A61P31/20
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;曾旻輝

1.氨基酸組成如SEQ?ID?NO.9所示的乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白或與SEQ?ID?NO:9所示的氨基酸序列具有90%同源性的乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白。

2.一種乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白的制備方法，其特征是，包括以下步驟：

a.重組質粒pET-28a-S的構建：將堿基組成如SEQ?ID?NO.2的序列經過限制性內切酶BamHI和HindIII雙酶切后，克隆入經同樣雙酶切的質粒pET-28a中，獲得重組質粒pET-28a-S；

b.重組質粒pET-28a-S-S1的構建：將堿基組成如SEQ?IDNO.6的序列采用限制性內切酶HindIII和NotI雙酶切后，克隆入經同樣雙酶切的重組質粒pET-28a-S中，獲得重組質粒pET-28a-S-S1；

c.乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白的表達和純化：將步驟b所得重組質粒pET-28a-S-S1轉化到大腸桿菌BL21（DE3），用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導表達，超聲破碎，離心棄上清，沉淀用含7.5-8.5M脲的Tris-HCl溶液溶解后離心取上清，用Ni²⁺親和層析柱純化，即得到乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是，所述步驟a是：以SEQ?ID?NO.1為模板，以SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4為引物，進行PCR擴增，擴增產物經限制性內切酶BamHI和HindIII雙酶切后，克隆入經同樣雙酶切的質粒pET-28a中，獲得重組質粒pET-28a-S。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征是，所述步驟b是：以SEQ?ID?NO.5為模板，以SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8為引物，進行PCR擴增，擴增產物經采用限制性內切酶HindIII和NotI雙酶切后，克隆入經同樣雙酶切的重組質粒pET-28a-S中，獲得重組質粒pET-28a-S-S1。

5.根據權利要求2-4任一項所述的制備方法，其特征是，所述步驟c為：將步驟b所得的重組質粒pET-28a-S-S1轉化大腸桿菌BL21（DE3）感受態細胞，用終濃度為0.5-1.0mmol/L的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷于溫度30-37℃，誘導表達4-6小時，收集菌體，超聲破碎，離心棄上清，沉淀用含7.5-8.5M脲的Tris-HCl（pH?7.8）溶液溶解后，離心取上清，用Ni²⁺親和層析柱純化，得到所述乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白。

6.權利要求1所述的乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白在乙肝病毒表面抗體檢測中的應用。

7.權利要求1所述的乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白在乙肝病毒表面抗體膠體金檢測試紙條中的應用。

8.權利要求1所述的乙肝病毒表面抗原重組嵌合蛋白在HBV重組嵌合疫苗中的應用。