[發明專利]一種殼聚糖包裹負電荷金納米粒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210535520.3
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN103071156A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 范黎;吳紅;喬友備
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K47/36
• 分類號: A61K47/36;A61K47/02;A61P35/00
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 汪人和

技術領域

本發明屬于制藥技術領域，具體涉及一種殼聚糖包裹負電荷金納米粒及其制備方法和應用。

背景技術

膠體金納米粒在生命科學研究領域應用廣泛，如藥物轉運，基因轉染，生物探針及組織分析等領域。尤其在化療藥物運載領域，納米金由于其粒徑小，比表面積大等優勢，可極大的提升化療藥的載藥量。

哺乳動物細胞膜表面絕大部分區域帶有負電荷，僅有少部分區域為中性或帶有正電荷。由于靜電斥力，陰離子分子難于與細胞表面結合，一般通過胞吞機制入胞。最近的研究結果表明，正電荷的金納米粒與細胞膜的結合能力為負電荷金納米粒的3倍以上，入胞能力是負電荷金納米粒的5倍以上。然而，Goodman小組的研究表明，正電荷的金納米粒具有細胞毒性，而負電荷的金納米粒生物相容性良好，無細胞毒性。Hauck小組的研究也表明，正電荷金納米粒的細胞毒性為負電荷金納米粒的27倍以上。上述缺點是金納米粒作為藥物載體的瓶頸。

發明內容

本發明的目的在于提供一種殼聚糖包裹負電荷金納米粒及其制備方法和應用，可有效提高藥物的入胞率和載體的載藥率。

為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案。

一種殼聚糖包裹負電荷金納米粒，包括殼聚糖（CS）凝膠納米粒以及包裹于殼聚糖凝膠納米粒內的用于載藥的負電荷金納米粒。

所述殼聚糖凝膠納米粒上連接有用于與細胞表面受體結合的配體。

所述配體為葉酸（FA）；通過在殼聚糖凝膠納米粒上連接配體如葉酸分子，可以提高殼聚糖包裹負電荷金納米粒的入胞效率。

所述負電荷金納米粒為C₅-Au-C₁₁-COOH。

上述殼聚糖包裹負電荷金納米粒的制備方法，包括以下步驟：首先，將殼聚糖通過三聚磷酸鈉交聯制得納米凝膠，將納米凝膠經超聲分散制得凝膠納米粒溶液，其次，將負電荷金納米粒加入凝膠納米粒溶液中，攪拌混合15分鐘-2小時。

所述納米凝膠的制備方法為：將殼聚糖溶解于體積分數為0.5-5%的醋酸水溶液中得質量濃度為1.5mg/mL的殼聚糖溶液A，將殼聚糖溶液A的pH調節為4.0-6.0后得殼聚糖溶液B，向殼聚糖溶液B中加入質量濃度為0.6mg/mL的三聚磷酸鈉（TPP）水溶液，然后攪拌10-60分鐘得殼聚糖納米凝膠，殼聚糖溶液B與三聚磷酸鈉水溶液的體積比為1：0.1-1.5。

所述殼聚糖在交聯前用葉酸進行修飾。

所述納米凝膠采用以下方法制備：將殼聚糖溶解于體積分數為0.5-5%的醋酸水溶液中得質量濃度為1.5mg/mL的殼聚糖溶液A，將1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）、琥珀酰亞胺（NHS）與葉酸（FA）加入二甲基亞砜（DMSO）中，攪拌0.5-2小時得混合溶液，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽：琥珀酰亞胺：葉酸的摩爾比為（1.2-2）：（1.0-1.5）：1，將殼聚糖溶液A的pH調節為4.0-6.0后得殼聚糖溶液B，按照殼聚糖與葉酸的摩爾比為1：1向殼聚糖溶液B中加入混合溶液，然后避光攪拌12-48小時，攪拌后用NaOH水溶液調節pH值至8.0-10.0得反應液，向反應液中加入質量濃度為0.6mg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，殼聚糖溶液B與三聚磷酸鈉水溶液的體積比為1：0.1-1.5，然后攪拌10-60分鐘，攪拌后在pH為7.4的磷酸緩沖液（PBS）中透析3天得葉酸修飾的殼聚糖（FA-CS）納米凝膠。

本發明通過調節pH、殼聚糖與三聚磷酸鈉的比例，可以降低殼聚糖凝膠的沉淀，獲得更多的凝膠納米粒。用0.6mg/ml的TPP溶液進行交聯，使得到的納米凝膠粒度更均勻，且分散性更好，粒徑更小，更適合作為納米藥物載體。

所述負電荷金納米粒（C₅-Au-C11-COOH）的制備方法為：在氮氣保護條件下將納米金核（Au-C₅）和11-巰基十一烷酸（MUA）在二氯甲烷（DCM）中攪拌反應24-36小時，納米金核與11-巰基十一烷酸的摩爾比為1：3-6，攪拌反應后旋轉蒸發除去二氯甲烷、收集沉淀（C₅-Au-C₁₁-COOH），分別用正己烷、二氯甲烷洗滌沉淀，洗滌后旋轉蒸發去除正己烷以及二氯甲烷，然后用蒸餾水溶解，溶解后在去離子水中透析2-7天，透析后冷凍干燥得負電荷金納米粒。

上述殼聚糖包裹負電荷金納米粒在向細胞內轉運藥物中的應用。