[發(fā)明專(zhuān)利]中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210533781.1
• 申請(qǐng)日: 2012-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102967714A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹青;潘學(xué)繼;王立凱;單存海;洪宇霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津市協(xié)和醫(yī)藥科技集團(tuán)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專(zhuān)利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征包括以下組份：

①中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，所述中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白簡(jiǎn)稱(chēng)NGAL；

②辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的NGAL單克隆抗體；

③包被有NGAL單克隆抗體的磁顆粒；

④白色不透明微孔板；

⑤洗滌液；

⑥化學(xué)發(fā)光底物A和B；

其中，所述包被有NGAL單克隆抗體的磁顆粒經(jīng)過(guò)以下步驟制備:

①取5.0ml磁顆粒質(zhì)量含量為2.5%的磁顆粒懸浮液，磁板分離棄上清，用去離子水洗磁顆粒；所述磁顆粒懸浮液中的液體是濃度為0.05mol/L、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液；

②用0.05mol/L?pH值為6.5的磷酸鹽緩沖液洗磁顆粒；

③將0.05mol/L?pH值為6.5的磷酸鹽緩沖液與步驟②獲得的磁顆?；旌鲜箍傮w積為5.0～10.0ml；

④加入5.0mgNGAL單抗，于搖床上勻化5～10分鐘；

⑤加入5.0～10.0mg碳二亞胺，于搖床上勻化5～10小時(shí)；

⑥用0.1mol/L?pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液洗滌2次；

⑦加入Tris-EDTA緩沖液，調(diào)整總體積至5.0ml，調(diào)pH為7.5，2～4℃保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的NGAL單克隆抗體是用下述方法制備：

①取1.0mg?NGAL單克隆抗體，加入0.5～1.0ml濃度為0.05mol/L，pH值為7.5的磷酸鹽緩沖液溶解，2～4℃保存；

②取5.0mg的辣根過(guò)氧化物酶，加入0.5ml去離子水，溶解后取出0.06～0.12ml，加入0.1ml濃度為0.1mol/L的NaIO₄溶液，室溫下避光反應(yīng)0.5～1.5小時(shí)；

③將步驟①與②獲得的液體混合，室溫下避光反應(yīng)4～6小時(shí)；

④向步驟③獲得的溶液中加入0.1ml濃度為5mg/ml的NaBH₄溶液，室溫下避光反應(yīng)1～2小時(shí)；

⑤用0.02mol/L的pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液透析12～24小時(shí)，再用HPLC進(jìn)行二次純化，收集蛋白峰，加入等體積的甘油后于-20℃下冷凍保存。?

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是所述洗滌液是用下述方法制備：

取6.05g三羥甲基氨基甲烷、8.55g?NaCl、0.5ml?Tween-20，加去離子水至1L，溶解后用HCl調(diào)pH至7.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是所述化學(xué)發(fā)光底物A工作液是用下述方法制備：

①配制0.05mol/L?pH值為8.0的Tris-Hcl緩沖液；

②將3～4mmol魯米諾加入到1000ml步驟①所述的緩沖液中，混勻，2～4℃避光保存。

5.如權(quán)利要求1所述的的試劑盒，其特征是所述化學(xué)發(fā)光底物B工作液是用下述方法制備：

①配制0.05mol/L?pH值為8.0的Tris～Hcl緩沖液；

②將0.5～0.7mmol四苯硼鈉、1.42mmol鐵氰化鉀、0.38mmol肉桂酸、7.56mmol過(guò)氧化氫加入到1000ml步驟①所述的緩沖液中，混勻，2～4℃保存。?