[發明專利]一種最適溫度提高的脂肪酶突變體及其應用

有效

• 申請號: 201210527837.2
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN102994471A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 喻曉蔚;徐巖;吳厚軍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/55;C12N15/10;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/81;C12P7/64;A21D8/04;C12R1/84
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種最適溫度提高的脂肪酶突變體，其特征在于在GenBank?EF405962公布的脂肪酶基因序列第310的氨基酸由Asp替換成Val。

2.一種獲得權利要求1所述脂肪酶突變體的方法，其特征在于以GenBank?EF405962公布的脂肪酶脂肪酶基因序列為出發基因，將其第310位的氨基酸由Asp替換成Val。

3.產權利要求1所述脂肪酶突變體的基因工程菌或轉基因細胞系。

4.權利要求3所述產脂肪酶突變體的基因工程菌的構建方法，其特征在于包括如下步驟：

1）采用化學全合成或PCR方法克隆編碼權利要求1所述脂肪酶突變體基因；

2）將步驟1）獲得的脂肪酶基因連接到大腸桿菌表達載體，得到重組表達載體；

3）將步驟2）獲得的重組表達載體轉化畢赤酵母GS115得到基因工程菌。

5.權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述表達載體為pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα或pPICZ。

6.應用權利要求4所述基因工程菌發酵生產脂肪酶突變體的方法，其特征在于以產脂肪酶突變體基因工程菌為生產菌株，按10％（V/V）接種量接入25mL?BMGY培養基中，30℃振蕩培養16～20h至OD600為2～6，離心收集菌體，用BMMY培養基稀釋至OD600為1，每隔24h添加0.5%的甲醇誘導表達，培養3-4d后，收集發酵上清液；將發酵上清液經過10KD超濾膜濃縮，SP-Sepharose?FF強陽離子交換層析和Phenyl-Sepharose?6FF疏水色譜柱層析后得到純化的突變脂肪酶活性組分。

7.權利要求1所述脂肪酶突變體應用于油脂加工、合成生物柴油或面包烘焙領域。