[發(fā)明專利]集成基因代謝和重排構(gòu)建工業(yè)釀酒酵母工程菌的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210527589.1
• 申請日: 2011-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN103114048A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳雪昌;王品美;鄭道瓊;陶香林;劉天喆
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/19
• 分類號(hào): C12N1/19;C12R1/865;C12R1/46
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種集成基因代謝工程和全基因組重排構(gòu)建工業(yè)釀酒酵母工程菌的方法，所述方法包括：

（1）誘導(dǎo)釀酒酵母菌株產(chǎn)孢，分離純化單倍體菌株，鑒定單倍體菌株交配型，選取交配型a的單倍體菌株Y1和交配型α的?單倍體菌株Y2作為出發(fā)菌株；

（2）然后分別敲除菌株Y1和菌株Y2的編碼甘油轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因FPS1，并在FPS1位點(diǎn)整合表達(dá)變鏈球菌（Streptococcus?mutans）的3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPN），對(duì)單倍體Y1和Y2分別采用G418^r和Zeo^r抗性標(biāo)記篩選，獲得單倍體基因工程菌株：G418^r抗性菌株YFG1和Zeo^r抗性菌株YFG2；

（3）分別使用紫外和EMS對(duì)菌株YFG1和菌株YFG2進(jìn)行誘變，獲得四個(gè)突變庫：YFG1紫外誘變庫、YFG1?EMS誘變庫、YFG2?紫外誘變庫和YFG2?EMS誘變庫；

（4）以體積濃度8%的乙醇YPD平板篩選生長迅速的單菌落進(jìn)行第一輪全基因組重排，用含300μg/mL?G418?和50μg/mL?Zeocin的YPD平板篩選重排子，誘導(dǎo)重排子產(chǎn)孢破壁后，用體積濃度12%?的乙醇YPD平板篩選生長迅速的單菌落進(jìn)行第二輪全基因組重排，用含300μg/mL?G418?和50μg/mL?Zeocin的YPD平板篩選重排子，通過模擬工業(yè)原料的濃醪發(fā)酵測試，獲得低副產(chǎn)物合成、高糖醇轉(zhuǎn)化率和高乙醇產(chǎn)量的工業(yè)釀酒酵母工程菌株。