[發明專利]一種DNA甲基化檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201210524641.8
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN103031375A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 高力;周陽;陳克平;張春霞;陳亮;連超群
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種DNA甲基化檢測試劑盒，其特征在于包括以下成分：

（1）反應液A:?0.3?mg/ml的石墨烯氧化物溶液?

（2）?反應液B:0.5?mM?的EDCI

（3）反應液C:?1.0?mM?sulfo-NHS。

2.一種DNA甲基化檢測試劑盒檢測DNA甲基化的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）制備具有石墨烯氧化物點陣的玻片；

2）待測DNA樣本的制備：從組織或血液中提取基因組DNA，以亞硫酸氫鹽處理的基因組DNA，通過PCR擴增，制備待檢測的DNA樣本；

3）檢測探針吸附到具有石墨烯氧化物點陣的玻片：合成具有淬滅石墨烯氧化物檢測熒光物質標記的DNA甲基化檢測探針在雜交盒中和1）制備的玻片進行物理吸附12?h，用PBS洗去多余的探針，掃描記錄玻片上石墨烯氧化物點陣的熒光強度；

4）DNA甲基化檢測：在3）中加入2）中制備的DNA樣本，在37°C下雜交60?min，PBS沖洗后進行掃描，吸附AuNP標記的探針時的石墨烯氧化物的熒光強度與加入DNA甲基化樣本時的石墨烯氧化物熒光強度的比值來檢測DNA甲基化。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，步驟1）是將1?ml反應液A點在氨基修飾的玻片上，干燥后，用超純水沖洗,?加入1?ml?反應液B和反應液C后在37°C下保存60?min。

4.根據權利2中所述的檢測方法，其特征在于淬滅石墨烯氧化物檢測熒光的物質為AuNP或其他能淬滅石墨烯氧化物檢測熒光的金屬顆粒。

5.根據權利2所述的檢測方法，其特征在于吸附AuNP標記的探針時的石墨烯氧化物的熒光強度與加入DNA甲基化樣本時的石墨烯氧化物熒光強度的比值接近為0，加入DNA甲基化樣本時的石墨烯氧化物熒光強度與未吸附AuNP標記的探針時的石墨烯氧化物的熒光強度接近1，證明檢測到DNA甲基化。