[發明專利]一種rs6311的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210523154.X
• 申請日: 2012-12-09
• 公開（公告）號: CN103122376A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發明（設計）人: 孔慶梅;張曉靜;邵宏;趙振國;劉叔平;鄂文;田新霞
• 申請（專利權）人: 鄂文
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京鑫浩聯德專利代理事務所(普通合伙) 11380
• 代理人: 高翔

1.一種rs6311的檢測試劑盒，該試劑盒包括探針，引物，MIX反應液，

其中所述探針，序列如下：rs6311T-fam?：CTGTGAGTGTCTGGC

rs6311C-vic：?CTGTGAGTGTCCGGC

其中所述引物，序列如下：

rs6311-F?：AGAGAGAACATAAATAAGGCTAGAAAACAGTA

rs6311-R?：CACTGTTGGCTTTGGATGGA。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，試劑盒中裝有：熒光反應管，去離子三蒸水，MIX反應液；

其中熒光反應管中裝有以下探針和引物：

其中所述探針，序列如下：rs6311T-fam?：CTGTGAGTGTCTGGC

rs6311C-vic：?CTGTGAGTGTCCGGC

其中所述引物，序列如下：

rs6311-F?：AGAGAGAACATAAATAAGGCTAGAAAACAGTA

rs6311-R?：CACTGTTGGCTTTGGATGGA。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，探針配制成：25μM，引物配制成：20μM。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，各試劑的比例如下：

每條探針0.1微升，每條引物0.8微升，去離子三蒸水，用1.5毫升小瓶盛裝，MIX用1.5毫升小瓶盛裝。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其中還包括石蠟油。

6.權利要求1所述試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

患者全血基因組DNA提取，提取方法如下：

在1.5毫升離心管中加入10微升蛋白酶K和100微升待檢樣品(EDTA抗凝全血)，并混勻，2000rpm離心10秒，加入200微升緩沖液B，顛倒混勻，56℃放置10分鐘，期間顛倒混勻2-3次，加入200微升無水乙醇，顛倒混勻，并加入吸附柱中，12000rpm離心30秒，倒掉非也，將吸附柱放回收集管，向吸附柱中加入500微升緩沖液C，12000rpm理性30秒，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管，向吸附柱中加入700微升漂洗液W2，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管，向吸附柱中加入500微升漂洗液W2，12000rpm離心30秒，倒掉廢液，將吸附柱放回收集管，然后12000rpm離心2分鐘，將吸附柱置于一個新的1.5毫升離心管中，室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液，向吸附膜中間部位懸空滴加100微升洗脫緩沖液TE，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心2分鐘，收集管中即為基因組DNA，

PCR擴增：方法如下：

使用GeneCopoeia公司所提供的2*Probe?AllinOne?Q-PCR?Mix按照合適的比例加入MIX，探針，引物以及上一步提取出來的基因組DNA，最后加入石蠟油，在熒光PCR儀上按照以下程序進行擴增：95℃10分鐘---40次循環（95℃10秒-60℃30秒），

按照擴增曲線進行單鏈多態性分析待檢樣品的基因型，方法如下：

使用單鏈多態性分析儀器，如使用BIO-RAD?iQ5儀，通過Taq-man熒光PCR檢測候檢位點待檢樣品的基因型，不同的基因型顯示的結果是不相同的，如正常代謝組（CC型）顯示的結果為：VIC標記探針擴增，

緩慢代謝組（CT型和TT型）顯示的結果為：FAM標記探針和VIC標記探針同時擴增，或者FAM標記探針擴增。