[發明專利]一種棉鈴蟲COPI β基因cDNA及其應用

有效

• 申請號: 201210520051.8
• 申請日: 2012-12-07
• 公開（公告）號: CN103849625A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 毛建軍;曾凡榮
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/435;C12N15/10;C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04
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1.一種棉鈴蟲COPIβ基因的cDNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種棉鈴蟲COPIβ基因表達的蛋白，其特征在于，其由權利要求1所述的cDNA所編碼，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.一種如權利要求1所述cDNA的克隆方法，包括以下步驟：

(1)從棉鈴蟲幼蟲提取總RNA，然后反轉錄合成cDNA；

(2)設計簡并引物，所述簡并引物正向序列如SEQ?ID?NO.3所示，反向序列如SEGID?NO.4所示；

(3)以步驟(1)得到的cDNA為模板，用步驟(2)所述的引物進行PCR擴增，得到擴增片段；

(4)純化步驟(3)得到的PCR產物，回收目的片段，取純化產物連接到pMD18-T載體上，然后轉化大腸桿菌感受態細胞，篩選含目的片段的陽性克隆；

(5)將步驟(4)所得的陽性克隆進行序列測定，得到權利要求1所述的cDNA。

4.一種如權利要求1所述cDNA的應用，其特征在于：從權利要求1所述的cDNA序列中選取SEQ?ID?NO.1中第625-645位21bp作為干涉靶標合成siRNA，siRNA正向序列如SEQ?ID?NO.5所示，反向序列如SEQ?ID?NO.6所示。將合成的siRNA配制成溶液涂布在煙草葉片表面對棉鈴蟲進行飼喂，棉鈴蟲取食煙葉后，COPIβ基因表達受阻，棉鈴蟲生長與代謝受抑制，死亡率提高。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述植物為煙草、棉花、小麥、玉米、高梁、大豆、豌豆、苜蓿、芝麻、番茄、辣椒、向日葵等棉鈴蟲寄主植物。