[發(fā)明專利]一種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210519498.3
• 申請(qǐng)日: 2012-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN103091438A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯宏衛(wèi);胡清源;張小濤;熊巍;陳歡;劉彤;韓書磊;姜興益;李中皓;邊照陽(yáng);張洪非;龐永強(qiáng);唐綱嶺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于卷煙濾嘴樣本的理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及卷煙濾嘴樣本的多環(huán)芳烴類化合物測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用液相色譜-光電電離-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-APPI-MS/MS)測(cè)定卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的方法。

背景技術(shù)

自1933年J.Cook首次從煤焦油中分離到苯并芘并誘發(fā)小鼠皮膚癌以來，苯并[a]芘作為確定的人類致癌物受到科研工作者的廣泛關(guān)注。腫瘤流行病學(xué)調(diào)查及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)苯并[a]芘具有較強(qiáng)致癌性，它與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，尤其與人類肺癌的發(fā)生高度相關(guān)。苯并[a]芘也存在于卷煙煙氣和抽吸過的卷煙濾嘴中，檢測(cè)抽吸過的卷煙濾嘴中的含量水平可以間接評(píng)估吸煙者感受苯并芘的量，對(duì)于吸煙危害性評(píng)價(jià)具有較為重要的意義。

到目前為止，已有研究者建立了高效液相色譜-熒光檢測(cè)法（HPLC-FL）檢測(cè)卷煙濾嘴中的苯并[a]芘的方法，但方法前處理比較復(fù)雜，包括液液萃取、固相萃取，且一個(gè)樣需要20個(gè)濾嘴。氣相色譜質(zhì)譜法（GC/MS）也被應(yīng)用于測(cè)定苯并[a]芘化合物。研究報(bào)道采用GC/MS測(cè)定了主流煙氣中痕量苯并[a]芘的方法，此方法的分離效果及色譜重現(xiàn)性好。但是，GC/MS法的前處理選用了固相萃取和濃縮過程，使得其較為復(fù)雜費(fèi)時(shí)。近年來，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）被廣泛應(yīng)用于新藥的發(fā)現(xiàn)與開發(fā)。液相色譜配備三級(jí)四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜生物基質(zhì)中低含量化合物的定量檢測(cè)，并且此方法一般具有較高選擇性和較短的分析時(shí)間。由于LCMS/MS配制的離子源一般為電噴霧電離和大氣壓化學(xué)電離離子源，這些離子源對(duì)于大分子有機(jī)化合物具有較好的電離效果，而對(duì)于多環(huán)芳烴類化合物的電離效果較差，因此限制了其在此領(lǐng)域的應(yīng)用。大氣壓光電離離子源（APPI）是一個(gè)新的電離方法，使用紫外線對(duì)樣品進(jìn)行電離，適合于低極性化合物的高靈敏度電離方法，尤其是在引入摻雜劑后可以較好的提高苯并[a]芘的檢測(cè)靈敏度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種采用液相色譜-大氣壓光電離-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-APPI-MS/MS)方法測(cè)定卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測(cè)定方法，包括以下工藝步驟：

（1）樣品的采集：收集抽吸卷煙后的濾嘴，去除煙絲殘存部分，置于棕色儲(chǔ)液瓶中低溫冷凍保存；

（2）樣品的前處理：取一個(gè)濾嘴，剝?nèi)グb紙和膠以后，放入25mL三角瓶中，加入200μL的1μg/mL的苯并[a]芘-d12，再加入9.8mL乙腈，振蕩萃取10min。萃取液經(jīng)0.22μm聚醚砜有機(jī)相濾膜過濾，收集濾液待LC-MS/MS分離分析；

（3）標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：分別稱取10.0mg苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12于兩個(gè)10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，得到1.0mg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的一級(jí)儲(chǔ)備液；分別移取100μL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的一級(jí)儲(chǔ)備液于100mL的容量瓶，乙腈定容至刻度，得到1.0μg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的二級(jí)儲(chǔ)備液，放入-20°C冰箱備用。用二級(jí)儲(chǔ)備液配制0.5，1，2，5，10，20和40ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

（4）LC-MS/MS測(cè)定：吸取配制好的不同濃度的苯并[a]芘的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入LC-MS/MS系統(tǒng)，測(cè)得其標(biāo)準(zhǔn)品峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值與目標(biāo)物濃度關(guān)系的一元線性回歸方程Y=0.199X+0.0079，相關(guān)系數(shù)≥0.999，其中Y代表分析物與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，X表示樣品待測(cè)液中目標(biāo)分析物的濃度，接著對(duì)振蕩萃取和過濾之后的樣品待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)分析物峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測(cè)液中的苯并[a]芘含量。

其中，LC-MS/MS測(cè)定條件如下所述：色譜條件：Dionex?Acclaim120C₁₈色譜柱（150mm×3mm?i.d.×3μmd.f.）；流動(dòng)相A為乙腈溶液，流動(dòng)相B為超純水；柱溫40°C；進(jìn)樣量5μL。摻雜劑：甲苯，流速為100μL/min；洗脫條件：95%A和5%B等度洗脫，流速為550μL/min；分析時(shí)間為8min。