[發明專利]一種卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法

有效

• 申請號: 201210519498.3
• 申請日: 2012-12-06
• 公開（公告）號: CN103091438A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 侯宏衛;胡清源;張小濤;熊巍;陳歡;劉彤;韓書磊;姜興益;李中皓;邊照陽;張洪非;龐永強;唐綱嶺
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

本發明屬于卷煙濾嘴樣本的理化檢驗技術領域，主要涉及卷煙濾嘴樣本的多環芳烴類化合物測定技術領域，具體涉及一種采用液相色譜-光電電離-串聯質譜儀(LC-APPI-MS/MS)測定卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的方法。

背景技術

自1933年J.Cook首次從煤焦油中分離到苯并芘并誘發小鼠皮膚癌以來，苯并[a]芘作為確定的人類致癌物受到科研工作者的廣泛關注。腫瘤流行病學調查及動物實驗研究發現苯并[a]芘具有較強致癌性，它與腫瘤的發生密切相關，尤其與人類肺癌的發生高度相關。苯并[a]芘也存在于卷煙煙氣和抽吸過的卷煙濾嘴中，檢測抽吸過的卷煙濾嘴中的含量水平可以間接評估吸煙者感受苯并芘的量，對于吸煙危害性評價具有較為重要的意義。

到目前為止，已有研究者建立了高效液相色譜-熒光檢測法（HPLC-FL）檢測卷煙濾嘴中的苯并[a]芘的方法，但方法前處理比較復雜，包括液液萃取、固相萃取，且一個樣需要20個濾嘴。氣相色譜質譜法（GC/MS）也被應用于測定苯并[a]芘化合物。研究報道采用GC/MS測定了主流煙氣中痕量苯并[a]芘的方法，此方法的分離效果及色譜重現性好。但是，GC/MS法的前處理選用了固相萃取和濃縮過程，使得其較為復雜費時。近年來，液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）被廣泛應用于新藥的發現與開發。液相色譜配備三級四級桿串聯質譜被廣泛應用于復雜生物基質中低含量化合物的定量檢測，并且此方法一般具有較高選擇性和較短的分析時間。由于LCMS/MS配制的離子源一般為電噴霧電離和大氣壓化學電離離子源，這些離子源對于大分子有機化合物具有較好的電離效果，而對于多環芳烴類化合物的電離效果較差，因此限制了其在此領域的應用。大氣壓光電離離子源（APPI）是一個新的電離方法，使用紫外線對樣品進行電離，適合于低極性化合物的高靈敏度電離方法，尤其是在引入摻雜劑后可以較好的提高苯并[a]芘的檢測靈敏度。

發明內容

本發明的目的在于提供一種采用液相色譜-大氣壓光電離-串聯質譜儀(LC-APPI-MS/MS)方法測定卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：卷煙濾嘴中苯并[a]芘含量的測定方法，包括以下工藝步驟：

（1）樣品的采集：收集抽吸卷煙后的濾嘴，去除煙絲殘存部分，置于棕色儲液瓶中低溫冷凍保存；

（2）樣品的前處理：取一個濾嘴，剝去包裝紙和膠以后，放入25mL三角瓶中，加入200μL的1μg/mL的苯并[a]芘-d12，再加入9.8mL乙腈，振蕩萃取10min。萃取液經0.22μm聚醚砜有機相濾膜過濾，收集濾液待LC-MS/MS分離分析；

（3）標準工作溶液的配制：分別稱取10.0mg苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12于兩個10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，得到1.0mg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的一級儲備液；分別移取100μL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的一級儲備液于100mL的容量瓶，乙腈定容至刻度，得到1.0μg/mL的苯并[a]芘和苯并[a]芘-d12的二級儲備液，放入-20°C冰箱備用。用二級儲備液配制0.5，1，2，5，10，20和40ng/mL標準工作溶液。

（4）LC-MS/MS測定：吸取配制好的不同濃度的苯并[a]芘的標準工作溶液，注入LC-MS/MS系統，測得其標準品峰面積和內標峰面積的比值與目標物濃度關系的一元線性回歸方程Y=0.199X+0.0079，相關系數≥0.999，其中Y代表分析物與內標物峰面積的比值，X表示樣品待測液中目標分析物的濃度，接著對振蕩萃取和過濾之后的樣品待測液進行測定，根據分析物峰面積和內標物峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中的苯并[a]芘含量。

其中，LC-MS/MS測定條件如下所述：色譜條件：Dionex?Acclaim120C₁₈色譜柱（150mm×3mm?i.d.×3μmd.f.）；流動相A為乙腈溶液，流動相B為超純水；柱溫40°C；進樣量5μL。摻雜劑：甲苯，流速為100μL/min；洗脫條件：95%A和5%B等度洗脫，流速為550μL/min；分析時間為8min。