[發明專利]魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法

無效

• 申請號: 201210518784.8
• 申請日: 2012-12-06
• 公開（公告）號: CN103060259A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 沙珍霞;陳松林;鄭媛;王娜;謝明樹
• 申請（專利權）人: 沙珍霞
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12R1/91
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 滑春生

1.一種魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，包括以下步驟：

(1)?頭腎組織的處理：將頭腎組織剪成小塊，加入胰蛋白酶進行消化，加入，細胞培養液終止消化，收集經消化處理的組織細胞懸液，離心去除上清；

(2)?原代培養：加入細胞培養液重懸后于培養箱中培養；

(3)?傳代培養：原代培養細胞開始增殖至組織塊周圍細胞暈停止生長后，加入胰蛋白酶消化懸起細胞，利用細胞培養液進行傳代培養；

其中，采用的細胞培養液為在基礎細胞培養液中添加胎牛血清、丙酮酸鈉、2-巰基乙醇、人堿性成纖維細胞生長因子。

2.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述的魚類是半滑舌鰨。

3.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述基礎細胞培養液pH為7.0-7.3。

4.按照權利要求3所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述基礎細胞培養液為MEM培養液。

5.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：在所述基礎細胞培養液進一步添加青霉素和/或鏈霉素。

6.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述基礎細胞培養液中的胎牛血清添加量為占細胞培養液總體積10-20%，優選20%。

7.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述基礎細胞培養液中的添加丙酮酸鈉、2-巰基乙醇、人堿性成纖維細胞生長因子在細胞培養液中分別達到0.1-5?mM、10-100?mM、1-20?ng/ml。

8.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述第2步驟中，所述培養中在24℃培養箱中培養，每隔7天半量更換細胞培養液一次。

9.按照權利要求1所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法，其特征在于：所述第3步聚傳代培養為：原代培養獲得的細胞用添加所述細胞培養液將細胞稀釋至2×10⁵細胞/ml濃度進行原瓶傳代培養；當瓶底細胞長至單層后在傳代中以2×10⁴-2×10⁵細胞/ml濃度進行分瓶接種，傳代間隔期為3-7天；傳至11代以后，細胞培養液中的胎牛血清含量減為5%-15%。

10.按照權利要求1至9任一項所述的魚類頭腎組織來源細胞系的建立方法獲得的細胞系。