[發明專利]超靈敏黃曲霉毒素B1酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210517982.2
• 申請日: 2012-12-06
• 公開（公告）號: CN103018458A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 時國慶;孫清;楊敬臣;李谷豐
• 申請（專利權）人: 北京普贊生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測黃曲霉毒素B₁的酶聯免疫檢測超靈敏試劑盒，所述試劑盒包括黃曲霉毒素B₁標準溶液，固相載體，酶標記物，底物顯色液，樣品稀釋液，終止液及濃縮洗滌液，其特征在于，所述固相載體為微孔板，且所述微孔板由黃曲霉毒素B1單克隆抗體包被，所述酶標記物為辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素B1完全抗原，所述底物顯色液含四甲基聯苯胺(TMB)，終止液含硫酸。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗體是黃曲霉毒素B1的特異性高親和力單克隆抗體，間接ELISA效價達1∶32萬；所述酶標抗原是黃曲霉毒素B1完全抗原與辣根過氧化物酶偶聯物；酶與完全抗原的偶聯比是3∶1～8∶1。

3.根據權利要求2所述試劑盒，其特征在于，所述酶標抗原含有：

黃曲霉毒素B1完全抗原

辣根過氧化物酶

所述黃曲霉毒素B1完全抗原的黃曲霉毒素B1與蛋白偶聯比是：8∶1～14∶1

所述酶與抗體的偶聯比是：3∶1～8∶1

4.根據權利要求1～3任一項所述試劑盒，其特征在于，所述濃縮洗滌液含有：

5.根據權利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述濃縮洗滌液含有：

6.一種檢測黃曲霉毒素B1的酶聯免疫檢測超靈敏試劑盒的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

A、制備固相載體：將0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH值為9.0-9.6)與曲霉毒素B1的特異性高親和力單克隆抗體或完全抗原以適當比例混合，將混合液負載于載體上，用含0.05％吐溫20(體積)的磷酸鹽緩沖液洗滌后，用保護液封閉保護上述洗滌后的載體；

B、制備辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素B1的完全抗原或單克隆抗體：采用改進過的高碘酸鈉法制備辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素B1的完全抗原或單克隆抗體，采用棋盤滴定法選擇最佳的酶標記物的工作濃度。酶標抗原或抗體溶于酶稀釋液中以制備抗原或抗體工作溶液；

C、制備底物顯色液

a)顯色A溶液的制備：以DMSO為稀釋液配制成較低濃度的四甲基聯苯胺(TMB)溶液即成。

b)顯色B溶液的制備：以去離子水為稀釋液配制成一定濃度的一水合檸檬酸、過氧化氫尿素和十二水磷酸一氫鈉混合液即成。

D、制備濃縮洗滌液：

濃縮洗滌液中含有：

E、制備黃曲霉毒素B1標準溶液：用黃曲霉毒素B1的純品配制，分裝0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ng/mL共6瓶，過濾除菌、分裝、低溫避光保存。

F、制備終止液：

終止液含有：

硫酸????????????????15％(質量)

G、制備樣品提取液

所述樣品提取液含有：

甲醇????????????????50～80％(體積)

NaCL????????????????2～10％(重量)

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述濃縮洗滌液含有：

所述樣品提取液含有：

甲醇?????70％????(體積)

NaCL?????4％?????(重量)