[發明專利]一種節旋藻蛋白的分離純化方法

有效

• 申請號: 201210516806.7
• 申請日: 2012-12-05
• 公開（公告）號: CN103044520A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 劉冰;秦松;張允允;邵明飛;宋璐非;谷洋洋;朱義松
• 申請（專利權）人: 中國科學院煙臺海岸帶研究所
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明屬于生化分離純化領域，特別涉及一種節旋藻蛋白的分離純化方法。

背景技術

海藻蛋白存在于藍藻，紅藻，以及部分隱藻和甲藻中。對節旋藻蛋白生物活性研究表明，節旋藻蛋白具有明顯的抗腫瘤、消炎等作用，同時節旋藻蛋白，能增強人體免疫功能、抗氧化、抗衰老，達到保健延壽，青春常在的功效。節旋藻蛋白不但是優質醫藥中間體，同時可作為醫藥、保健原料，廣泛用于保健食品及醫藥領域。

其主要功能：

l.抗輻射：

節旋藻蛋白能顯著地減輕和逐漸消除輻照、化療對血白細胞和骨髓細胞的損傷，并能加速外周血白細胞和骨髓有核細胞的恢復；

2.抗癌：

節旋藻蛋白能顯著抑制癌細胞生長，可用于癌癥的防治。

3.調節免疫：

節旋藻蛋白能提高淋巴細胞活性，通過淋巴系統提高機體免疫功能，全面增強機體的防病、抗病能力；

4.促進造血：

節旋藻蛋白對骨髓造血功能具有刺激作用，因而對白血病和再生障礙性貧血等血液頑癥有著積極的輔助治療作用；

5.延緩衰老等

由上述作用可知，節旋藻蛋白具有極大的開發潛力。但目前由于大規模分離純化節旋藻蛋白的技術還未成熟，傳統的節旋藻蛋白制備方法主要是凍融法，硫酸銨鹽析，上各種層析柱，工藝繁瑣，得率低，成本高，價格昂貴，并且不適合工業化生產。

發明內容

本發明的目的在于提供一種節旋藻蛋白的分離純化方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種節旋藻蛋白的分離純化方法，

步驟1）將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24-72小時離心，收集上清液；

步驟2）將上清液經濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液pH達到6.5-7.2，并進行攪拌；

步驟3）上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入水經濾膜進行超濾濃縮，超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節旋藻蛋白。

所述步驟1）按體積比1：15-30將藻粉在PBS中充分浸泡，混勻后常溫下避光放置24—72小時，再以18000-22000g離心20-30分鐘，收集上清液。

所述步驟2）將上清液經50KD的濾膜進行超濾濃縮，濃縮液中加入甲殼胺使混合液中甲殼胺終濃度為0.25—0.35％，并用堿調節混合液中pH達到6.5-7.2，同時進行攪拌15-30min是混合液充分混勻。

所述加入堿濃度在40-80g/L；堿為氫氧化鈉或氫氧化鉀。

所述步驟3）上述攪拌均勻的混合液離心取上清液，上清液中加入其體積2—3倍水經50KD的濾膜超濾濃縮，所得濃縮液再次加入其體積2-3倍水再次進行超濾濃縮，超濾濃縮共進行4-9次，進而充分超濾置換鈉離子得到純化濃縮液；濃縮液噴霧干燥，即得藥品級節旋藻蛋白。

所述濃縮液噴霧干燥具體為噴霧干燥的進風溫度為150—200℃，出風溫度為70-90℃。

所述藥品級節旋藻蛋白，其中藻藍蛋白的純度大于3.0，含量大于61.5％，別藻藍蛋白的含量小于3％，其它蛋白的含量小于2％。

本發明所具有的優點：目前國內尚無大量制備藥品級節旋藻蛋白的生產工藝，本發明提供的藥品級節旋藻蛋白制備方法，提取出的蛋白純度高，提取率高達藻粉干重的4％，是目前常用提取節旋藻蛋白得率的3倍，工藝簡單有效，生產成本低，產量大，簡單有效，且適合大規模制備藥品級節旋藻蛋白等特點。由本方法制備的節旋藻蛋白，節旋藻蛋白的藻藍蛋白純度大于3.0，含量大于61.5％，別藻藍蛋白的含量小于3％，其它蛋白含量小于2％，水溶性好，容易被人體消化和吸收。因此，本發明提供的藥品級節旋藻蛋白制備方法為其廣泛應用提供基礎。

附圖說明書

圖1為本發明實施例提供的藥品級節旋藻蛋白制備方法流程圖。

圖2為本發明實施例提供制備所得藥品級節旋藻蛋白的吸收光譜圖。

具體實施方式

本發明藥品級節旋藻蛋白制備方法步驟包括，參見圖1：

步驟1，將市售的藻粉加入到PBS中，攪拌均勻；

步驟2，將浸泡好的藻液離心，并取上清液；

步驟3，把得到的上清液進行超濾濃縮，得粗提濃縮液；

步驟4，向得到的粗提濃縮液中加入甲殼胺，并用氫氧化鈉溶液調節pH，攪拌均勻，攪拌得混合物；

步驟5，將混合物離心，取上清；

步驟6，上清液中加入去離子水，超濾置換鈉離子后，得到純化濃縮液；