[發明專利]一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201210512730.0
• 申請日: 2012-12-04
• 公開（公告）號: CN103105384A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 王嘎;程自卿
• 申請（專利權）人: 河南生生醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 北京東方匯眾知識產權代理事務所(普通合伙) 11296
• 代理人: 劉淑芬

技術領域

本發明涉及生物和醫學檢測技術領域，具體涉及一種在同一反應體系內同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物指標CA125、CEA、CA153的時間分辨熒光免疫檢測試劑盒，同時還涉及該試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應用。

背景技術

乳腺癌發病年齡分布在東西方國家有所不同，在高發區如北歐、北美等國家，乳腺癌從20歲左右開始出現，在絕經期即45-50歲之前保持快速上升勢頭，大約年齡每增長10-20歲發病率上升1倍，絕經期后上升相對緩慢，75-85歲達到最高。而在亞洲等低發地區，乳腺癌的發病率在絕經后會略下降，一般乳腺癌的發病高峰在45-55歲之間，亞洲人移居西方國家后仍保持這種年齡分布特征。早期發現、確診乳腺癌，實施手術切除，依然是目前該疾病最有效的治療方法。因此，在早期、更加準確的確診乳腺癌依然是治療該疾病的關鍵。

目前，診斷乳腺癌的常用檢測指標有CA125、CEA、CA153等幾種。在實際診斷乳腺癌時，一般是用CA125、CEA、CA153三種指標綜合確診乳腺癌，因為三項指標綜合分析在特異性和敏感度上明顯高于單一指標。目前常規實驗室或醫療單位用于檢測該三項指標通常分別采用單一試劑盒，即一個試劑盒針對一種腫瘤標記物進行檢測，此種方式存在的缺點是：1、檢測步驟繁多，費時費力；2、幾種標記物分別采用幾種單指標試劑盒檢測，由于不同生產廠家的試劑盒存在差異，且同一廠家的不同試劑盒由于檢測的標記物不同可能會存在控制條件、參數的差異而導致檢測結果存在誤差，此種誤差在綜合分析三種標記物的特異性和敏感性上會產生較大的影響，可能導致判斷結果相差甚遠。因此，開發一種能夠在相對同一的檢測條件下同時能夠檢測該三種腫瘤標記物的試劑盒，就能降低由于人為原因造成的檢測誤差，大大提高綜合分析檢測結果的特異性和敏感性，為下一步的研究或判斷做出準確的結論提供更充分的依據。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中存在的問題，提供一種在同一反應體系內同時綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物指標CA125、CEA、CA153的時間分辨熒光免疫檢測試劑盒。

本發明的目的還在于提供一種該試劑盒的應用。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是：一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，把三種乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153綜合在同一微孔的同一反應體系內，采用時間分辨熒光免疫法檢測，該試劑盒包括：分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板；用Eu³⁺標記的抗CA125、Tb³⁺標記的抗CEA、Sm³⁺標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體；分析緩沖液；共用熒光增強劑；洗滌液；質控品。

所述的第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的制備方法為：把分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體用包被緩沖液稀釋，制得抗體包被液，然后向微孔板的每個孔中分別加入100μl的所述抗體包被液，于37℃包被2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板三次，然后再向微孔板的每個孔中分別加入200μl的封板液，于室溫封閉2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板兩次，冷凍干燥，制得第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板。

其中，所述抗體包被液中，分別抗CA125、CEA、CA153的第一株單克隆抗體的濃度均為0.009～0.014g/L。

所述用Eu³⁺標記的抗CA125、Tb³⁺標記的抗CEA、Sm³⁺標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體中，用Eu³⁺標記的抗CA125抗體、Tb³⁺標記的抗CEA抗體、Sm³⁺標記的抗CA153抗體的質量配比為：Eu³⁺標記的抗CA125抗體:Tb³⁺標記的抗CEA抗體:Sm³⁺標記的抗CA153抗體=（7～13）:（6～11）:（6.5～13）。

分析緩沖液的制備方法為：向每升濃度為0.05mol/L、pH值為8.0的Tris-Hcl緩沖液中加入9g?NaCl、0.5g?NaN₃、10g?BSA、0.1ml吐溫-40、5g聚乙二醇，混合均勻，即制得分析緩沖液。