[發明專利]一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒及其應用

無效

• 申請號: 201210512730.0
• 申請日: 2012-12-04
• 公開（公告）號: CN103105384A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 王嘎;程自卿
• 申請（專利權）人: 河南生生醫療器械有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 北京東方匯眾知識產權代理事務所(普通合伙) 11296
• 代理人: 劉淑芬

1.一種時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，把三種乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153綜合在同一微孔的同一反應體系內，采用時間分辨熒光免疫法檢測，其特征在于：該試劑盒包括：分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板；用Eu³⁺標記的抗CA125、Tb³⁺標記的抗CEA、Sm³⁺標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體；分析緩沖液；共用熒光增強劑；洗滌液；質控品。

2.根據權利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于：所述的第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的制備方法為：把分別抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體用包被緩沖液稀釋，制得抗體包被液，然后向微孔板的每個孔中分別加入100μl的所述抗體包被液，于37℃包被2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板三次，然后再向微孔板的每個孔中分別加入200μl的封板液，于室溫封閉2小時，然后用生理鹽水沖洗微孔板兩次，冷凍干燥，制得混合抗體包被的微孔板。

3.根據權利要求2所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于：所述抗體包被液中，分別抗CA125、CEA、CA153的第一株單克隆抗體的濃度均為0.009～0.014g/L。

4.根據權利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于：所述用Eu³⁺標記的抗CA125、Tb³⁺標記的抗CEA、Sm³⁺標記的抗CA153第二株單克隆抗體混合抗體中，用Eu³⁺標記的抗CA125抗體、Tb³⁺標記的抗CEA抗體、Sm³⁺標記的抗CA153抗體的質量配比為：Eu³⁺標記的抗CA125抗體:Tb³⁺標記的抗CEA抗體:Sm³⁺標記的抗CA153抗體=（7～13）:（6～11）:（6.5～13）。

5.根據權利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于：所述共用熒光增強劑的制備方法為：解離部分：將70～200μmol的PTA、2～7μmol的氧化釔、0.6g的Triton?X-100和300ml的乙醇混合，用水定容至1升，用乙酸調pH值至3.5，制得解離部分；增強部分：將0.1～0.4mmol的鄰菲羅啉和0.2mol的Tris混合，用水定容至1L，制得增強部分。

6.根據權利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于：所述洗滌液的制備方法為：在濃度為0.01mol/L、pH值為7.4的PBS緩沖液中加入吐溫-20，混勻，制得吐溫-20質量百分比濃度為0.05%的PBS溶液，然后用質量百分比濃度為0.2%的NaN₃溶液防腐處理，制得洗滌液。

7.根據權利要求1所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒，其特征在于：所述質控品為CA125、CEA、CA153標準品的混合物。

8.一種權利要求1-7任一所述的時間分辨熒光法綜合檢測乳腺癌試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應用。

9.根據權利要求8所述的試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應用，其特征在于，包括以下步驟：

（1）用分析緩沖液稀釋質控品，制成具有系列濃度梯度包含有CA125、CEA、CA153標準品的混合溶液；

（2）將待測樣品與步驟（1）制備的標準品混合溶液分別加入抗CA125、CEA、CA153第一株單克隆抗體混合抗體包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分別與CA125、CEA、CA153結合的標記有稀土離子螯合物的第二株單克隆抗體混合抗體，之后加入共用熒光增強劑，進行時間分辨熒光免疫檢測，得到發光值；

（3）根據測定的具有系列濃度梯度的包含CA125、CEA、CA153標準品的混合溶液的發光值做標準曲線；

（4）以測定的待測樣品中的CA125、CEA、CA153發光值和標準品中CA125、CEA、CA153各自的標準曲線的發光值做比較，得出待測樣品中CA125、CEA、CA153各自的含量。

10.根據權利要求9所述的試劑盒在綜合檢測乳腺癌腫瘤標志物CA125、CEA、CA153中的應用，其特征在于：所述待測樣品為人體血清。