[發(fā)明專利]一種9-羰基-10,11-去氫澤蘭酮的快速提取檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210510356.0
• 申請日: 2012-11-18
• 公開（公告）號: CN102980956A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡延春;廖飛;王云飛;舒剛
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮的快速提取檢測方法。?

背景技術(shù)

紫莖澤蘭(Eupatorium?adenophorum?Spreng)是一種世界性惡性有毒雜草，自20世紀(jì)40年代從緬甸、印度、越南等國邊境傳入我國以來，迅速遍及云南、貴州、廣西、四川、西藏等省區(qū)。紫莖澤蘭的繁殖能力強(qiáng)，傳播速度快，以每年30公里的速度向北、向東推進(jìn)。在國家總局公認(rèn)的首批入侵國內(nèi)的16種外來物種黑名單中，紫莖澤蘭名列第一，被稱為生物癌癥。其中9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮為紫莖澤蘭的主要致肝臟毒性成分及殺蟲的生物活性成分。因此有必要建立一種能在常規(guī)實驗室推廣應(yīng)用的高效提取檢測9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮的技術(shù)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供一種9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮的快速提取檢測方法，能快速的提取EUPTOX?A，并精確的檢測其純度，為科學(xué)研究提供了技術(shù)基礎(chǔ)。?

其具體技術(shù)方案為：?

一種9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮的快速提取檢測方法，包括以下步驟：?

A、樣品預(yù)處理：采集紫莖澤蘭葉片在沒有陽光的地方陰干或凍干，然后粉碎；?

B、甲醇超聲一步提取法：稱取上述A步驟樣品，溶于甲醇，置于40MHz超聲提取器或超聲波清洗器，在40℃超生提取30min，提取2-3次，即提取完全，過濾得到濾液；?

C、減壓蒸干：將步驟B所得的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中40℃減壓蒸干，得到浸膏，按浸膏與甲醇的用量比為1∶5溶解，待完全溶解加入蒸餾水至甲醇含量為20％進(jìn)行分散；?

D、萃取：上述C步驟的甲醇水提液用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，乙酸乙酯的量為甲醇水提液的1/2，取上層減壓蒸干得到浸膏，為了提取率高可進(jìn)行多次萃取；?

E、硅膠拌樣，干法上樣進(jìn)行硅膠柱層析：按浸膏與硅膠H的用量比為1∶1～1∶2，攪拌混合后，加入層析柱后，先用二氯甲烷做洗脫液，洗去低極性雜質(zhì)；再用二氯甲烷∶乙酸乙酯(98∶2，v/v)洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干得到浸膏；?

F、過樹脂：浸膏溶于甲醇∶水∶三氯甲烷85∶10∶5(v/v/v)溶劑中，上XAD-2/D101大孔?樹脂柱洗脫以除去色素等雜質(zhì)，收集洗脫液，減壓蒸干得到粗品，粗品反復(fù)硅膠層析，并且分時間段收集洗脫液，薄層色譜法對洗脫液進(jìn)行分類及合并同類項，展開劑為石油醚∶丙酮/12∶1(v/v)，Rf值為0.45的收集液為所提取物質(zhì)；?

G、HPLC檢測：上述F步驟所得物質(zhì)用HPLC進(jìn)行濃度檢測，HPLC條件：C18色譜柱規(guī)格為：250mm×4.6mm，5.0μm；流動相為20％-100％的甲醇；流速為1mL·min^-1；進(jìn)樣量10μL；檢測波長為255nm；柱溫為25℃；梯度洗脫時間程序為0-10min。?

步驟B中樣品和甲醇的質(zhì)量比為1∶10。?

步驟E中浸膏與硅膠H的用量比1∶2。?

步驟G中，梯度洗脫時間程序為10min。?

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：?

1.本提取方法采用的是甲醇超聲一步法提取，避免了提取液的多次轉(zhuǎn)移而造成的污染、損失等誤差，充分保證了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。?

2.提取方法涉及的儀器非常簡單。所需的主要設(shè)備器材僅為測定干重時使用的烘箱，分析天平和甲醇提取時使用的超聲提取器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、冰箱等等，在普通實驗室均可以操作。?

3.另外，本提取方法操作簡單，大大減輕了工作強(qiáng)度，大大降低了提取的成本。?

4.本發(fā)明中采用的HPLC檢測方法可將毒素的保留時間縮短在10min內(nèi)。該檢測方法值得在9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮毒素的檢測中廣泛應(yīng)用推廣。?

附圖說明

圖1為本發(fā)明一種9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮毒素的快速提取檢測方法的工藝流程圖。?

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。?

實施例1?

A、樣品預(yù)處理：采集紫莖澤蘭葉片在沒有陽光的地方陰干，然后粉碎；?

B、甲醇超聲一步提取法：稱取上述A步驟樣品20g，溶于100ml的甲醇，置于40MHz超聲波清洗器，40℃超生提取30min，提取2次，即提取完全，過濾得到濾液；?