[發明專利]一種氯羥吡啶膠體金層析檢測試紙條或卡

有效

• 申請號: 201210507849.9
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN103018440A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 張海棠;范國英;王自良;姜金慶;王淑云;楊雪峰;丁涵;李藝
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種氯羥吡啶膠體金層析檢測試紙條或卡，包括襯板和在襯板上依次銜接的樣品墊、金標結合墊、硝酸纖維素膜、玻璃吸水墊，其特征在于：所述金標結合墊為吸附有膠體金標記的抗氯羥吡啶單克隆抗體或多克隆抗體玻璃纖維棉，在所述硝酸纖維素膜上有用氯羥吡啶-載體蛋白偶聯物印制的隱形檢測線，用山羊抗小鼠IgG印制的隱形對照線。

2.根據權利要求1所述的氯羥吡啶膠體金層析檢測試紙條或卡，其特征在于，所述的隱形檢測線和隱形對照線平行排列組合為“||”。

3.根據權利要求1所述的試紙條或卡，其特征在于，所述金標物結合墊為：將1∶100～1∶500稀釋(體積比)的膠體金標記抗體吸附于玻璃纖維棉中，4℃低溫真空干燥，制備CLOP金標物結合墊。

4.根據權利要求3所述的試紙條或卡，其特征在于，所述膠體金標記抗體制備方法為：將稀釋后的膠體金和單克隆抗體或多克隆抗體按照不同的濃度倍比，選擇膠體金顯色紅色的最小稀釋濃度作為膠體金標記抗體的最佳量，用于膠體金標記抗體的制備。

5.根據權利要求4所述的試紙條或卡，其特征在于，所述單克隆抗體或多克隆抗體的制備方法為：

A1、氯羥吡啶半抗原的改造：親核取代反應引入酯鍵，然后在堿、酸的作用下，合成含有羧基的氯羥吡啶半抗原；

A2、CLOP-2C-載體蛋白人工抗原的合成：采用活潑酯法合成CLOP人工免疫原，稱取75mg?CLOP半抗原溶解于3mL?N，N-二甲基甲酰胺中，加入二環己基碳二亞胺35mg和N-羥基琥珀酰亞胺18mg，在室溫下磁力攪拌反應過夜12h，此液為A；稱取20mgBSA溶于2mL?0.01mol/L?pH?7.4的磷酸鹽緩沖液溶液中，此液為B；將反應液B置于磁力攪拌器上，4℃下將反應液A緩慢滴加到反應液B中，攪拌反應過夜。次日將反應液置于經過預處理的透析袋內，在PBS中攪拌透析7天，得到偶聯產物CLOP-2C-BSA，分裝上清液，凍存于-20℃冰箱中，備用；

A3、氯羥吡啶單克隆抗體和多克隆抗體的獲得：用CLOP-2C-BSA免疫6周雌性BALB/C小鼠5只，劑量為50μg/0.2mL/只，背部皮下分點注射。采用細胞融合技術無菌取脾臟制備脾細胞，在聚乙二醇-1500作用下與NS0骨髓瘤細胞進行融合；用間接ELISA法和阻斷ELISA法進行陽性孔篩選，選擇強陽性、抑制率高、細胞生長旺盛的孔進行有限稀釋克隆化，擴大培養、凍存并鑒定，獲得一株雜交瘤細胞株；之后采用體內誘生腹水法制備CLOP?mAb；

多抗制備：用CLOP-2C-BSA載體蛋白結合抗原免疫新西蘭白兔，免疫劑量為50μg～100μg/次，背部皮下分多點注射；首免，用合成的人工抗原與等量弗氏完全佐劑乳化；加強免疫，用合成的人工抗原與等量弗氏不完全佐劑乳化，連續免疫4～5次，每次間隔4～8周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法測其定效價達到105以上時，采血并分離收集高免血清。以飽和硫酸銨鹽析法提取IgG抗體，-20℃凍存備用。