[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物及其在制備附睪頭部基因條件性敲除小鼠模型中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210507321.1
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN103849634B
• 公開（公告）日: 2016-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張永蓮;謝勝松;黃行許;徐娟
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物，其特征在于，所述的構(gòu)建物包括外源Cre基因以及與外源Cre基因可操作連接的啟動子元件；其中，所述的啟動子元件是脂質(zhì)運載蛋白5（Lipocalin5）的啟動子或其活性片段，并且所述啟動子具有驅(qū)動外源Cre基因在動物附睪頭部特異表達(dá)的功能。

2.如權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物，其特征在于，所述的啟動子元件選自下組：

(a)核苷酸序列如SEQ?ID?NO.:1所示的多核苷酸；

(b)核苷酸序列與SEQ?ID?NO.:1所示序列的同源性≥95%(較佳地≥98%)，且具有驅(qū)動外源基因在動物附睪頭部中特異表達(dá)的功能的多核苷酸；

(c)如SEQ?ID?NO.:1所示多核苷酸的5’端和/或3’端截短或增加1-60個(較佳地1-30，更佳地1-10個)核苷酸，且具有驅(qū)動外源基因在動物附睪頭部特異表達(dá)功能的多核苷酸。

3.如權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物，其特征在于，所述的外源Cre基因具有如SEQ?ID?NO.:2所示的核苷酸序列。

4.一種基因表達(dá)盒，其特征在于，所述基因表達(dá)盒從5’至3’依次具有下述元件：啟動子元件、Cre基因的ORF序列、和終止子序列，并且所述的啟動子元件是脂質(zhì)運載蛋白5（Lipocalin5）的啟動子或其活性片段，所述啟動子具有驅(qū)動Cre基因在動物附睪頭部特異表達(dá)的功能。

5.一種載體，其特征在于，所述載體含有或權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物，或權(quán)利要求4所述的基因表達(dá)盒。

6.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求5所述的載體、或其染色體整合有權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物、或其染色體整合有權(quán)利要求4所述的基因表達(dá)盒。

7.權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物、或權(quán)利要求4所述的基因表達(dá)盒的用途，其特征在于，用于特異性調(diào)控外源Cre基因在動物附睪頭部特異表達(dá)。

8.一種制備轉(zhuǎn)基因動物的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)提供轉(zhuǎn)基因的動物細(xì)胞，所述動物細(xì)胞含有權(quán)利要求5所述的載體、或其染色體整合有權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物、或其染色體整合有權(quán)利要求4所述的基因表達(dá)盒；

(b)將步驟(a)所述的轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞再生為動物，從而獲得轉(zhuǎn)基因動物。

9.一種轉(zhuǎn)基因動物的用途，所述的轉(zhuǎn)基因動物是用權(quán)利要求8所述的方法制備的，其特征在于，所述的轉(zhuǎn)基因動物用于小鼠附睪頭部區(qū)域特異敲除或過表達(dá)目標(biāo)靶基因。

10.一種在動物附睪頭部特異性表達(dá)外源Cre基因的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)提供權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物；

(b)將步驟(a)中的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物導(dǎo)入動物細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)化的動物細(xì)胞；

(c)將步驟(b)中轉(zhuǎn)化的動物細(xì)胞再生成動物，從而使外源Cre基因在動物附睪頭部特異性表達(dá)。

11.一種在動物附睪頭部區(qū)域特異敲除目標(biāo)靶基因的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)提供權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物；

(2)用步驟(1)的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建物轉(zhuǎn)化動物細(xì)胞，獲得轉(zhuǎn)化的動物細(xì)胞；

(3)將步驟(2)中轉(zhuǎn)化的動物細(xì)胞再生成動物，從而使外源Cre基因在動物附睪頭部特異性表達(dá)；

(4)將步驟(3)中獲得的轉(zhuǎn)基因動物與floxed化的轉(zhuǎn)基因動物交配，從而可獲得特異敲除目標(biāo)基因的子代動物。