[發明專利]一種高效基因槍轉化小麥葉片單細胞瞬間表達的方法及其應用

有效

• 申請號: 201210507031.7
• 申請日: 2012-12-03
• 公開（公告）號: CN102978230A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 邢莉萍;曹愛忠;錢晨;王秀娥;陳佩度
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12Q1/02;A01H5/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

1.一種高效基因槍轉化小麥葉片單細胞的方法，其特征在于：使用綠色熒光蛋白GFP基因作為報告基因，以小麥第一葉的離體葉片為轉化受體進行基因槍轉化，小麥葉片采用固體保鮮培養基固定，基因槍轉化采用直徑為1μm的鎢粉，用量為300ug/槍，質粒DNA用量為750ng/槍，轟擊距離采用可裂膜氦壓為1350psi，可裂膜與受體膜距離為6mm，受體與阻擋網距離為6cm。

2.權利要求1所述的方法在白粉病抗病基因篩選和/或功能鑒定中的應用。

3.一種利用權利要求1所述的方法分析外源基因抗白粉病功能的方法，其特征在于包括如下步驟：

1）采用權利要求1所述的方法將含有候選基因的質粒通過基因槍轉化小麥葉片；

2）接種白粉菌，觀察基因瞬間表達的葉片單細胞對白粉菌的抗性作用，以白粉菌吸器指數大小作為抗性高低的衡量標準。

4.利用權利要求3所述的方法篩選到的含有Hv-SGT1基因的表達載體。

5.根據權利要求4所述的表達載體，其特征在于所述的Hv-SGT1的表達載體是以pBI220為出發載體，將Hv-SGT1基因插入pBI220的BamHI和SacI酶切位點間所得。

6.權利要求4或5所述的含Hv-SGT1的表達載體在培育抗白粉病小麥品種中的應用。