[發明專利]一株槭射脈革菌菌株及其在甲霜靈農藥殘留降解中的應用

有效

• 申請號: 201210506098.9
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN103122316A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發明（設計）人: 袁海生;戴玉成;魏玉蓮
• 申請（專利權）人: 中國科學院沈陽應用生態研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C02F3/34;A62D3/02;C12R1/645;C02F101/38;A62D101/04;A62D101/28
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明屬于環境微生物領域，是利用微生物的方法降解化學農藥殘留，涉及一株槭射脈革菌菌株Phlebia?acerina及其在高濃度甲霜靈農藥殘留降解中的應用其應用。?

背景技術

化學農藥具有適用范圍廣、防治對象多、生產成本低、防治效果好以及經濟效益高等優點，其廣泛適用極大地促進了現代農業的發展，提高了農業生產的勞動效率和機械化程度。但是不可避免地，大量使用農藥殺傷昆蟲天敵和有益微生物、使有害生物產生抗性、造成人、畜中毒、易對植物產生藥害等問題，進入環境中的化學農藥，一部分可通過陽光照射、土壤中微生物等的作用，而逐步降解失效；另一部分最終會通過“食物鏈”的作用，進入人體，對人造成長期危害。各類化學農藥目前已廣泛進入全球空氣及大氣沉降物、水體、土壤、底泥級生物體等自然環境中，成為環境中無所不在的污染物，因此探索對農藥殘留進行有效降解的方法成為研究人員長期努力的一個重要研究方向。而在該領域研究中，近年來廣泛興起的使用微生物對農藥殘留進行生物降解成為熱點領域，通過微生物作用將農藥大分子分解成小分子化合物，并使其喪失活性。由于微生物個體小、繁殖迅速、比表面大等特點。它們較之其它生物更易適應環境，并可通過自然突變產生新菌種，產生新的酶系統，具有新的代謝功能，從而可參與對人工新合成化合物的降解與轉化作用，因此微生物對降解農藥殘留具有巨大潛力。白腐真菌是一類能夠生長在木材基質上，造成木材白色腐朽的一類真菌，除了能夠降解木材中的木質素、纖維素和半纖維素外，還能夠有效降解多種環境污染物，包括目前很多種類的人工合成化學農藥，其生長過程中分泌的漆酶、錳過氧化物酶和木質素過氧化物酶等酶系能夠非專一性降解這些環境污染物。白腐真菌種類繁多，其對環境污染物的降解能力也千差萬別，因此獲得對化學農藥的高效降解菌株并運用于實踐，對降低農藥殘留對環境的危害具有現實意義。?

本專利是從原始森林的腐木上分離得到的一株高效降解卵菌殺菌劑——甲霜靈的白腐真菌槭射脈革菌Phlebia?acerina?Y3667，實驗表明該菌能夠在水瓊脂培養基中利用甲霜靈作為唯一碳源和能源而生長，并使甲霜靈降解；在添加外源營養物的液體培養條件下，該菌?48h能夠將混入培養基中5mg/L的高濃度甲霜靈降解82%以上，并且在較寬的pH范圍內均有較好的降解效果。充分說明該菌可以用于水體及表面殘留的甲霜靈的生物降解。目前尚無利用Phlebia?acerina降解甲霜靈農藥殘留研究的文獻報道。?

發明內容

本發明的目的是提供一株槭射脈革菌菌株及其在高濃度甲霜靈農藥殘留降解中的應用該菌株具有在水體農藥殘留及表面殘留的甲霜靈的生物降解的工業化應用前景。?

一株槭射脈革菌菌株，該菌株命名為槭射脈革菌（Phlebia?acerina）保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所），保藏日期是2012年11月15日保藏編號為：CGMCC6809。?

2.按權利要求1所述的槭射脈革菌菌株，其特征在于：菌落為棉絮狀，乳白色；菌落由生殖菌絲組成，生殖菌絲薄壁到稍厚壁，直徑1.8-6微米，多簡單分隔，常分枝，菌絲內容物在棉蘭試劑中有嗜藍反應，在碘化鉀試劑中無變化；平皿培養3天菌落直徑4厘米；該菌株的ITS?rDNA序列已經提交到GenBank數據庫（GenBank登錄號：KC218570），發現該序列與Phlebia?acerina菌株BMC3014的基因序列同源性達99%。?

所述槭射脈革菌菌株的培養過程為：將所述的槭射脈革菌菌株Phlebia?acerina?Y3667菌絲體接種到直徑60毫米平皿培養基上，在28-30℃，平皿培養基上生長3-5天；解剖刀刮取菌絲，接入液體培養基中，2個培養皿刮取的菌絲接種到100ml培養液中，于28-30℃，140rmp/min轉速條件下振蕩培養3-5天，獲得包含其分泌的胞外降解酶的培養液，其為菌絲及菌液的混合菌劑；?

所述的平皿培養基組成為麥芽浸粉10g，瓊脂18g，加水至1L，pH自然；?

所述的液體培養基組成為麥芽浸粉10g，磷酸二氫鉀0.5g,CuSO₄0.1g,CaCl₂0.01g,MnSO₄0.01g，pH自然，加水定容至1L。?

在經過培養的培養液100ml中，加入最終濃度5-10mg/L的甲霜靈農藥，于30℃，轉速140rmp/min，搖床震蕩培養，培養時間48小時以上。?