[發明專利]一種醋酸加尼瑞克的純化方法

有效

• 申請號: 201210504961.7
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102993274A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 戴柱;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/16
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙) 44248
• 代理人: 韓英杰;許建

技術領域

本發明涉及一種多肽藥物的純化方法，特別涉及加尼瑞克的純化方法，屬于藥物化學領域。

背景技術

加尼瑞克，英文名Ganirelix，分子式為C₈₀H₁₁₃ClN₁₈O₁₃，是一合成的與內源性促性腺素釋放素(GnRH)(又稱促黃體生成素釋放素，LHRH)類似的十肽化合物，是GnRH的拮抗劑，結構式如下：

本品競爭性拮抗促性腺的GnRH受休，從而變異途徑，引起快速、可逆性地抑制促性腺激素(黃體生成素LH和促卵泡激素FSH)分泌。其抑制垂體分泌LH比抑制分泌FSH更顯著，從而降低性激素的產生。通過抑制中周期GnRH對LH誘導波動，本品能夠抑制排卵、卵母細胞成熟分裂和黃體化。對患卵巢過度刺激癥婦女，本品能夠預防LH波動及相關刺激，并提高植入和妊娠比率，是一種很有市場前景的多肽藥物。

用于純化的加尼瑞克粗肽采用氨基樹脂樹脂，利用Fmoc-AA進行固相手工合成，肽樹脂用TFA裂解，得到白色固體的粗肽。

目前合成加尼瑞克的成熟的純化方法文獻報道較少。因此加尼瑞克的純化是制備工藝中的難點，尤其公斤級以上大規模制備純化已成為制約加尼瑞克產業化的瓶頸之一。

現有技術CN102584945A公開了一種加尼瑞克的純化方法，采用的純化流動相為0.1%醋酸體系，在乙腈體積比10%~50%范圍內線性梯度洗脫;因采用現有技術合成方法制備加尼瑞克，在裂解步驟會使加尼瑞克含有大量三氟乙酸，而因三氟乙酸的酸度遠大于醋酸，與加尼瑞克有更強的結合能力，使加尼瑞克的成鹽形式包括了醋酸鹽和三氟乙酸鹽，這種混合鹽形式使得精肽的成鹽不均一，不利于進一步純化，而且三氟乙酸對人體也是有毒性的，不能直接用于原料藥和制劑生產。

為解決現有技術存在收率低的難題，提高醋酸加尼瑞克的純化收率，降低生產成本，還需對純化方法進一步的研究。

發明內容

本發明針對現有工藝缺陷，如醋酸鹽不穩定、雜質難以分離、不利于放大生產等等，旨在提供一種成本低廉、高收率、工藝過程簡單、樣品雜質少且穩定可控、有利于實現產業化的加尼瑞克純化工藝。

為實現上述目的，本發明采取以下技術方案：

一種醋酸加尼瑞克的純化方法，包括以下步驟：

(1)加尼瑞克粗肽的純化：用體積比為3：1的純化水和乙腈溶解加尼瑞克粗肽制備濃度為50g/ml—100g/ml的溶液，備用；采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，上樣上述溶液，以一定濃度高氯酸鹽/磷酸溶液為A相，以乙腈為B相，梯度洗脫的HPLC方法純化加尼瑞克粗肽。

所述步驟(1)中，流動相A中高氯酸鹽物質的量濃度為20mM-100mM，優選50mM；流動相A中用磷酸調pH的范圍為1.5—2.5，優選2.0。

所述步驟(1)中，梯度洗脫為35min內流動相由75%A+25%B變化為65%A+35%B。。

其中，作為優選，所述高氯酸鹽為高氯酸鈉、高氯酸鉀、高氯酸銨中的一種或幾種。

流動相的選擇是通過流動相篩選實驗實現的，通過分別用各種鹽緩沖體系進行純化，比較其純化效果，主要是比較雜質去除效果和收率，篩選出最適合的流動相。相對于本發明中的流動相，其它的溶劑系統對于粗肽中雜質尤其是異構體雜質的去除效果不如本發明中的流動相好。

選擇高氯酸鈉、高氯酸鉀、高氯酸銨的依據是高氯酸鹽對于加尼瑞克異構體雜質的分離效果最好，采用別的酸鹽達不到這種效果，而對于化學合成多肽來說，異構體雜質是最難去除的雜質。流動相A中高氯酸鹽物質的量濃度為20mM—100mM提供了足夠的緩沖能力和離子化強度，使純化效果得到保證，同時肽不會在高鹽濃度下析出。如果高氯酸鹽物質的量濃度低于20mM，鹽體系的緩沖能力降低，且離子化強度不夠可能導致洗脫峰拖尾或純化效果不好；如果高氯酸鹽物質的量濃度高于100mM，則鹽濃度過高導致加尼瑞克可能鹽析，同時增加了無謂的物料成本。優選濃度是50mM將各優點結合起來找到的平衡點濃度，在該濃度下既能保證好的純化效果，又能保證肽的物化性質穩定，減少物料成本。

流動相A中用磷酸調pH的范圍為1.5—2.5可以使得洗脫峰形不拖尾，保證好的雜質尤其是異構體雜質分離效果，同時又保證肽在流動相中不析出，加尼瑞克的物理性質決定了流動相pH值越高就越容易析出。如果磷酸調pH范圍低于1.5，將會使得色譜填料被破壞，高于2.5則會導致加尼瑞克在流動相中析出。優選pH保證雜質尤其是異構體雜質的去除效果和肽穩定性得到最優結合。