[發明專利]一種艾塞那肽固相合成方法

無效

• 申請號: 201210504949.6
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102942625A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 蘇賢斌;錢依冰;毛怡春;葉青;董海軍
• 申請（專利權）人: 南京工業大學;南京英沛生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明涉及多肽藥物合成技術領域，具體涉及一種艾塞那肽固相合成方法。?

背景技術

糖尿病(diabetes?mellitus)是由于胰島素絕對或相對不足引起的以高血糖和多并發癥并存為特征的內分泌代謝性常見病、多發病，據世界衛生組織(WHO)最新公布數據顯示，2007年全球糖尿病患者人數已達1.8億，且發病率仍逐年增加，預測到2025年，全球糖尿病患者人數將達3億，成為繼心腦血管和癌癥之后的人類第三大殺手。?

糖尿病主要分為I型（胰島素依賴型，insulin?dependent?diabetes，IDDM)和II型（非胰島素依賴型糖尿病，non-insulin?dependent?diabetes，NIDDM)，其中II型糖尿病患者占90%以上。II型糖尿病患者多存在胰島素抵抗和胰島素分泌不足兩方面異常，在發病的中晚期往往出現胰島β細胞凋亡。目前臨床使用的口服降糖藥的作用機理多為增強胰島素敏感性或促進胰島素分泌以穩定血糖，均無法解決β細胞凋亡這一難題。然而，胰高血糖素樣肽-1（Glucagon-like?peptide?1,GLP-1）及其類似物藥物的應用使得II型糖尿病的治療獲得突破性進展，有望為糖尿病治療提供全新的選擇方案。但由于GLP-1易被二肽酶（dipeptidyl?pepidiase?Ⅳ，DPP?Ⅳ）迅速降解，在體內半衰期只有2分鐘左右，故外源GLP-1難以獲得臨床使用。?

Exendin-4是一種從美洲希拉巨蜥(Heloderma?suspectum)唾液中分離得到的含有39個氨基酸的天然多肽激素，與GLP-1有53%的序列同源性，不但具有類GLP-1促胰島素分泌的功能，而且其體內穩定性也遠高于GLP-1。根據Exendin-4的這一特點，美國Amylin公司和Eli?Lilly公司聯合開發了化學合成的藥物Exendin-4(又稱Exenatide，式I化合物，中文名艾塞那肽，商品名Byetta)。Byetta是世界上首個腸促胰島素類似物藥物，于2005年4月經美國FDA批準上市。研究表明，艾塞那肽不僅能很好地控制血糖，還可促進胰島細胞的新生和增殖，減少β細胞凋亡，改善β細胞功能，具有非常明顯的臨床應用優勢。此外，臨床研究中發現艾塞那肽還能夠減慢胃腸排空的速度，使人沒有饑餓感而減少攝入食物，從而使人的體重下降。?

其結構式如下：?

??1???????????????5???????????????????10??????????????????15?

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-?

20??????????????????25??????????????30??????????????????????35?

Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂

艾塞那肽的制備方法主要有生物合成法與化學合成法。生物合成法利用人工基因重組方式得到Exenatide全序列（如專利CN101501209A）。化學合成法通常可采用常規的全固相合成（如專利WO2008109079A2、CN101357938A、CN101538324A）技術。全固相合成操作簡單，對于一些片段較短的肽鏈是一個快捷高效的方法。然而，隨著肽鏈的延長，其中疏水性強的肽段形成β-折疊的可能性很大，固相合成方法往往導致出現困難序列。此外，固相肽合成中還存在肽鏈與樹脂載體之間的分子集聚（aggregation）現象，這都會造成偶聯和脫保護效率大大降低。?

在艾塞那肽的固相合成中，主要的挑戰有兩處。一處是肽鏈中部從第26到第19個氨基酸的序列中存在多個疏水性氨基酸，形成第一個“困難序列”區，固相合成實踐表明，第26位的Leu、第23位的Ile、第21位的Leu及第19位的Val縮合都非常困難，即便使用了改善的反應條件，如變換縮合反應體系、延長反應時間、多次重復縮合等，結果亦收效甚微。第二個“困難序列”區涉及到三個連續的谷氨酸殘基。在固相合成中，重復的谷氨酸序列在帶上側鏈保護基后，疏水性大大增加，導致在樹脂上產生扭曲的部分，這使得難以在該重復的谷氨酸序列上繼續偶聯其他氨基酸以延長肽鏈。?